目的探讨凝血酶溶液低温保存对蚓激酶滴度稳定性的影响。法将凝血酶溶液通过在冰箱中冷冻法保存，然后定期取出用于确定标题蚓激酶及其对标题蚓激酶的确定进行统计分析的效果。该药物的分析和验证方法应用于凝血酶溶液25天。行激酶滴度的方法学验证。

　　果将凝血酶溶液冷却0至25天，并用于制备琼脂糖纤维蛋白平板。
　　对激酶滴度的测定没有显着影响。凝血酶溶液冷却30天后，用于测定的激酶滴度低。准曲线的线性关系也差，并且冲击是很重要的：对于制冷25天的凝血酶溶液用于方法确定的标题的验证，精度，准确度和线性度是良好。论凝血酶溶液适用于0-25的时间段。脂糖纤维蛋白平板不影响蚓激酶滴度的测定。[关键词]凝血酶溶液，冷冻保存，测定滴度，稳定的，该方法的验证[分类号] TQ461 [文档代码] B [项目编号] 1673-7210（2014）05（c）中-0105 - 在滴定试验稳定性冷冻凝血酶溶液04Effets lumbrokinaseGUO灵岩熊先红陈小蓉李丽周文贵品管部，江中药业有限公司，江西省南昌市330004，中国[摘要]方法冷冻凝血酶溶液的方法是本凝血酶溶液保存在冰箱中，则蚓激酶的标题是在有规律的时间确定的，冷却的凝血酶溶液对测试下的稳定性的分析分析了蚓激酶。用冷藏25天的凝血酶溶液结果上有标题蚓激酶的确定当凝血酶溶液有明显时凝血酶溶液冷却至30天的效果没有影响显著并且蚓激酶的滴度很弱，标准曲线的线性关系也是平庸的。血酶溶液来确定25制冷的方法的物质被用作方法结论凝血酶为0至25天的冷冻溶液更适合，使用的剂量的血纤维蛋白琼脂糖平板的验证制冷剂凝血酶溶液不影响蚓激酶功效的测定和判断[关键词]凝血酶溶液;制冷;标题测试;稳定性;验证方法。血酶是滴度激酶测定的重要标准试剂，其用于凝结纤维蛋白原。国国家药品生物控制研究所提供的标准凝血酶试剂为每分子150 BP。前，所述激酶钌的滴度测定，标准凝血酶试剂应该被用来制备标准凝血酶试剂和150ml（1 BP /毫升）必须是préparés.Le用于制备纤维蛋白琼脂糖平板是凝血酶溶液的实际量。
　　去3ml或147ml凝血酶溶液，导致标准试剂的大量浪费。剩余的147ml凝血酶溶液冷藏（例如，在低温，1至4℃），以防止变质和失活。要将适当的量用于制备用于测定滴度的琼脂糖 - 纤维蛋白板，就可以充分利用凝血酶溶液。少标准凝血酶试剂的浪费。而，没有关于使用冷冻保存的凝血酶溶液制备用于低温激酶滴定的琼脂糖 - 纤维蛋白板的研究或应用。此，检查低温凝血酶溶液对蚓激酶滴度测定的影响尤为重要。箱的制冷和保存的原理是，以减少微生物的繁殖和代谢在低温环境的能力，减少了对冷藏物品和的重要手段的微生物的有害作用保持食物和药物。年来已广泛报道了药物的低温保存[1-6]，但关于酶的低温保存的报道很少[7-9]。

　　本文中，所制备的凝血酶的溶液在4℃下放置在冰箱和周期性地取出用于测定蚓激酶的滴度的比较由新鲜制备的凝血酶溶液测定蚓激酶下，以及冷藏25天。血酶溶液用于冷冻保存期间测试凝血酶溶液到标题蚓激酶的确定的效果，并研究分析冷藏凝血酶溶液的方法为标题的确定的可能性哼激酶。冻保存凝血酶溶液的有效期。料与方法材料粉末干激酶粉末（批号：13020001，标题26 100 U / mg，江中药业有限公司）;标准激酶标准（中国中国药品生物制品检定所，批号：140650-200502），凝血酶标准试剂（中国中国药品生物制品检定所，批号的控制：140605-201125 ），标准试剂纤维蛋白原（中国国立医药及生物制品，批号控制：140605-201137），氯化钠（广东光华化学有限公司），琼脂糖（国药集团化学试剂有限公司）。法制备凝血酶溶液的方法是取凝血酶150 BP，加入0.9 ml 0.9％氯化钠溶液，制备每毫升含1 BP的凝血酶溶液。的下1 BP / mL的浓度制备的凝血酶溶液凝血酶溶液的冷冻保存方法被放置在250ml的容量瓶中，并密封在冷藏冰箱（1-4℃）。法确定所述轨道激酶[10]定期（每4天）的一种方法，移动冷冻凝血酶溶液的合适用量在恒定温度和湿度（37℃）1个小时的孵化器，测量准确3根据国家药物标准WS-（X-052）-2001Z-2010方法制备凝血酶溶液。备并使用琼脂糖纤维蛋白平板。确称取3份的6毫克蚓粉末激酶激酶和高达25毫升的国家药品标准WS-（X-052）-2001Z-2010，标题激酶滴度被确定为实验组。照组是根据国家标准药物WS-（X-052）-2001Z-2010用于确定所述搁板和下琼脂糖 - 纤维蛋白与新鲜制备的凝血酶溶液制备的。组3次平行实验。于验证的精确度和线性关系方法[10]需要25毫升25天凝血酶溶液在恒定的温度和湿度（37℃）1个小时的孵化器，测量准确3毫升的凝血酶溶液根据国家药学标准WS-（X-052）-2001Z-2010制备琼脂糖纤维蛋白平板的方法，备用。

　　确称取6份6毫克粉末的蚓蚓激酶激酶和高达25 mL.Selon美国标准WS-药物（X-052）-2001Z-2010，激酶标题被确定。确验证方法[10]使用标准恢复方法验证精度。的凝血酶溶液适量25天在恒定温度和湿度（37℃）1个小时的孵化器，测量准确3毫升的每个产品的参考方法WS-凝血酶溶液（X -052）-2001Z-2010用于制备琼脂糖。维蛋白板，备用。确称取六个部分干粉6毫克蚓激酶和最多至25ml准确地提取的5.00微升激酶的干粉溶液和5.22微升6000 U / mL的标准溶液根据国家药品标准WS（X-052）激酶 - 2001Z-2010上确定所述点和激酶蚓的标题为基础的方法中，并计算峰的恢复。
　　计学方法SPPS 15.0统计软件来分析对骨骼肌激酶骨架粉末和测试方法T（假设两个样品和其他方差）滴定数据来比较差异检验的显着性。11]差异在统计学上显着，p <0.05。题朊病毒干粉激酶表1的测定结果的结果分析显示了干prase激酶粉末的标题（实验组）和用于确定蚓激酶干粉新鲜制备的溶液蚓激酶的标题（对照组）。1中的数据的统计分析表明，该凝血酶溶液冷却为0-25天，干粉蚓激酶的平均滴度为26130 U / mg和对照组的平均滴度为26 106 U / mg。通过对0至25天凝血酶溶液测得的测试分析吨激酶朊病毒干粉表明，有实验组和对照组之间没有统计学显著差异（P> 0 ，05），表明凝血酶溶液是冷藏的。约25天后测量的激酶干粉的滴度与通过新制备的凝血酶溶液测定的钛干粉滴度之间没有显着差异。1显示在凝血酶溶液冷冻后30天和35天，实验组中激酶干粉的滴度降低。试分析吨滴定数据激酶朊病毒干粉到第30天及第35天的凝血酶溶液冷却后表明，有实验组和对照组之间的统计学差异显著（ P <0.05），表明凝血酶。在由所述溶液中测得的干粉蚓激酶标题的统计学差异显著冷却至第30天及第35天相比于新鲜制备的凝血酶溶液（P <0.05）。准曲线的分析曲线的相关系数r对应于在研究变量之间的线性相关的相关系数，药物分析的r值等于或大于0.9900 [更大10。2示出了凝血酶溶液冷藏0-25天和r的实验组的值大于0.9930更大，这表明该标准曲线的相关性好，凝血酶溶液冷却至30天，并且r值是0.9910，小于0.9930，表明凝血酶溶液冷冻30天后，在标准曲线的相关比以前的标准曲线的略低25 jours.La凝血酶溶液冷藏35天和r值是0.9895，这是小于0.9900，表明凝血酶溶液的相关曲线35天后差冷藏。适合激酶滴度测定。验组和标准曲线中的研究（r值）精密分析凝血酶溶液至25天的不同时期的对照组的表2相关系数为用于纤维蛋白平板制备标题蚓激酶激酶滴度分别为25，727。25 949，26 118，25 838，26 006，25 782 U /毫克，平均滴度为25903 U / mg和相对标准偏差为0.57％，这表明纤维蛋白板用于制备冷冻25天凝血酶溶液的激酶滴度。量结果稳定，精度高，重复性好。密度分析示于表3中。过冷冻25天凝血酶溶液制备的纤维蛋白板用于测定激酶加滴度。均回收率为98.64％，RSD为0.90％，表明通过重构凝血酶溶液25天制备纤维蛋白。于确定激酶滴度的斑块的准确性是良好的。中冷却蚓激酶的滴度测定凝血酶溶液制备的线性关系纤维蛋白平板的回收富集的滴度测定激酶分析的3结果，标准曲线的回归方程为y = 0 ，8474x-1.11365，r = 0.9954。
　　表明激酶滴度的线性浓度在2000至10，000U / mL的范围内是良好的。论在室温下储存期间酶溶液的活性逐渐降低，主要是由于细菌，霉菌和酵母等微生物的污染。此，为了有效地保存酶溶液，必须杀死或抑制酶溶液中的微生物。中，降低酶溶液的储存温度是抑制酶溶液中微生物的最直接有效的方法。究表明，该液体可能果胶酶为90天的贮存条件下保持低温（5和10℃之间），例如山梨酸钾和对羟基苯甲酸丙酯。
　　的保留率（89.4％）高于酶溶液的保留率。保留（81.5％）在室温下保持90天[12]。文从激酶滴定的角度，冷库建造间接分析凝血酶的低温保存稳定性。研究表明，凝血酶溶液冷藏0-25天，纤维蛋白平板制备的琼脂糖对标题蚓kinase.Toutefois的确定没有显著效果，之后将溶液冷却凝血酶30天后，制备由琼脂糖纤维蛋白平板测定的亲本激酶。题是低的，标准曲线的线性关系也差，这表明制冷30的凝血酶溶液后的天数对蚓激酶的滴度确定一个显著效果。原因的分析，可能是由于凝血酶溶液冷冻（0〜25 j）的顶部的失活，并且在纤维蛋白琼脂糖平板的制备凝血酶是一种过度反应，甚至如果凝血酶灭活的少量可以是纤维蛋白被完全凝固，这是不足够的，以确定蚓激酶的效价：当所述凝血酶溶液被延长（30天后），将酶的失活逐渐增加，并且一些存活的凝血酶不能完全凝固纤维蛋白原。此，测得的ω激酶滴度低且不稳定。溶液在低温下（1〜10℃）或在室温下被禁用，而冷冻保存可以减缓酶溶液，其比在室温下的失活速率。要研究和进一步讨论冷藏过程中凝血酶溶液的失活速率。物分析的方法学验证是证明该分析方法适用性的有效方法。血酶溶液冷却至25天已被用作对象的验证方法，其具有良好的代表性和能有效地解释标题的确定凝血酶溶液的整体效果冷藏后0至25天的蚓激酶。过键验证元件，诸如精度，准确度和线性关系的实验分析，将琼脂糖纤维蛋白平板用期间25天重构纤维蛋白琼脂糖平板制备。的准确性，精确度和线性度都很好，表明它是冷藏的。备25天凝血酶溶液以制备琼脂糖 - 纤维蛋白平板，并且确定蚓激酶滴度的方法是可行的。整的分析，冷却凝血酶溶液0〜25天比较合适，纤维蛋白琼脂糖平板的制备不影响判定和标题蚓激酶的确定。
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