精子测试来自罗马繁殖雄性，6与防冻剂相关联：10％的乙二醇（乙烯Clycol，EG） 5％二甲亚砜（DMSO）（胞内的防冻液组合），冷库安装5％EG 10％ DMSO（细胞内防冻剂的组合），5％甘油 4％蔗糖（细胞内混合组合和防冻剂），10％甘油 4％蔗糖（细胞内混合组合和防冻剂），5％蔗糖 10％聚乙二醇（PEG）（胞外的防冻液组合）和10％蔗糖 5％PEG（胞外防冻液的组合）和碱液A1，A2，A3 A4，A5和A6的六倍冷冻稀释液有被冻结了。果表明，六倍稀释精子的成活率平均为0.66±0.183，0.600±0.082，0.400±0.083，0.370±0.171，0.100±0.000 0.225±0.150。A1冷冻后速率，A2，A3和A4均较A5和A6的显著升高（P <0.01）的另一组之间的差异不显著（P> 0.05） 。种子;精子的运动;防冻液;后冷冻活动中图分类号：831.4小号文献标识码：A文章编号：1001-0769（2018）10-0064-02随着科学技术和研究方法的发展不断完善，技术动物授精已成为改善畜禽的重要手段，而精液的低温保存在人工授精中起着重要作用。前，有充足的信息表明，防冻剂对牛，马等大型牲畜的精液具有保护作用。家禽，波巨得到她的小鸡与1951年大原在第一时间和其他施拉姆冷冻精子孵化，觉得冷冻精子受精率明显高于自然交配鸡高。多研究人员的测试结果也表明冷冻精液的受精率低于新鲜精液。管我国对家禽冷冻精子进行了研究，但仍处于试验阶段，尚未推广到生产阶段，主要是因为鸡精精具有较低的抗冻能力。
　　冻后他的动力太弱了。此，本实验旨在探讨不同防冻剂对鸡精子冷冻保存效果的影响。料和方法材料测试动物测试测试的动物是罗马公鸡，身体健康状况良好，精子质量极佳。鸡饲养在同一个房子里，分两个阶段保存在一个简单的笼子里。由获取食物和水在整个测试期间，进料每天一次（9.00〜10.00），自由饮水，房子的温度维持在20℃和25℃之间湿度在50％到68％之间。础组合物：玉米751.40克/千克，豆粕98.10克/公斤，其84，00克/公斤，沸石粉末3.00克/ kg的硫酸锰为0.30g /公斤，磷酸钙18.50克/千克，石粉35.00克/ kg的盐为3.0g /千克，米糠2.59克/公斤，硫酸亚铁为0.26g / kg的，亚硒酸钠0.08克/ kg的赖氨酸1.10克/千克，甲硫氨酸1.30克/公斤，冷库安装硫酸铜0.22克/ kg的氯化胆碱为0.88g /千克，0.29克穆维他/ kg时，水平和营养含量：钙10.0克/ kg的粗蛋白116.8克/ kg的代谢能12.3 MJ / kg时，总6.5克磷/ kg时，有效的磷4.2 g / kg，可消化的蛋氨酸3.1g / kg，可消化的赖氨酸5.8g / kg。析试剂纯化试剂主要包括果糖，磷酸二氢钾，蔗糖，磷酸氢二钠，二甲亚砜（DMSO），聚乙二醇（PEG）和乙二醇（乙二醇）。
　　EG），蛋黄，醋酸，龙胆紫和蒸馏水。要仪器是电子分析天平，生物显微镜，电子恒温浴，普通温度计，acidomètres，容量瓶中，渗压计，冰箱，液氮罐和吸液管（表1）。子收集方法通过背腹部按摩法收集精子。收集的鸡精液用纱布过滤，减少粪便，血液，尿酸盐等的污染。后拿起气瓶，用毛巾把它带回实验室。
　　运输过程中，尽量避免震动，防止阳光直射。合后收集的原料汽油必须大于80％才能进行冷冻试验。释的稀释剂配方基于鸡精液的特征，考虑营养素选择，渗透压，pH，缓冲容量等，并确定剂量。
　　确称取的形式中使用的试剂，溶解在蒸馏水中，过滤器，滤纸，稀释到100毫升，在100℃下在水浴中加热消毒30分钟，冷却至室温密封蜡并存放在阴凉处。础溶液（液体）的溶液9.002克，17.118克蔗糖，0.461克磷酸二氢钾和0.803克磷酸氢二钠，制备成具有512毫渗透摩尔浓度的渗透压和pH的溶液6.74。冷冻的液体（液体Ⅱ）加入与基液6个不同的组合防冻液（液体Ⅰ）中，细胞内的防冻液（10％EG 5％DMSO，5％EG 10％DMSO），细胞内防冻剂（ 5％甘油 4％的蔗糖，10％甘油 4％蔗糖），细胞外防冻剂（5％蔗糖 10％PEG，10％蔗糖 5％PEG）由Al，A2，A3，A4，A5，A6溶液的。子和平衡精液分离收集在青霉素瓶以剂量0.2毫升，以1:1的比率稀释的：在加入到蛋黄液体和冷冻精液1的温度。

　　棉花包裹在冰箱中并在4℃至5℃之间缓慢冷却，平衡1小时。冷冻液滴通过一个吸入管吸入，并冷却约-80℃的铜网的表面上至-120℃的液氮中（-196℃），以制备小的冷冻颗粒（每个颗粒大小为0.1毫升）。冻条件是快速和均匀的：精子颗粒必须的congélation.Lorsque颗粒结束后存放2至5分钟，从黄色至白色转动，铜网可以被浸没在液态氮。冻和除霜用热水解法（干解冻），热水解方法是将1-2冷冻精子粒料在一个小的薄壁管和在水连续振荡在40℃下结婚直至粒子大多是（约75％）时熔化，从水浴中取出试管并保持试管的底部在你的手（以防止不完全解冻或解冻过度烧焦的精液）并摇晃直至完全融化。像冷冻后精子存活率，并作出记录。精子冷冻之前，将制剂进行显微镜400次以观察精子活力并记录。冻后，将解冻的精子置于连续显微镜下观察冷冻后的存活率。决于整个精液，线性操作设置为在一条直线上精液0.5 1.0，50％和精子的10％在0.1的直线，等等。
　　用sPss软件通过ANOVA分析数据分析测试数据。差异显着时，使用Tukey方法进行几次比较。冻后各组合的结果和冷冻后存活分析见表2.表2显示A1，A2，A3和A4的冷冻后速率显着高于A5和A6的那些（P <0.01），Al，A2和A3，A4，A3，A4和A5，A6的剩余水平。
　　冻后无显着性差异（P> 0.05）。论冷冻保护剂可根据其渗透性分为细胞内抗冻剂（渗透性）和细胞外抗冻剂（非渗透性）。该实验中，DMSO，EG和甘油用作防冻剂​​和渗透蔗糖和PEG作为防冻剂不可渗透研究对不同防冻液紧贴凝胶的保护作用鸡精子。果表明，在A1后冷冻速率，A2，A3和A4均较A5和A6（P <0.01）的显著更高，如EG，DMSO和甘油是细胞内和防冻液渗透防冻剂。
　　换进入细胞细胞内的水分，这种替代脱水或结合细胞的水，以防止电池内的冰晶体的形成，从而使水在过冷状态，降低的上限危险区域和减少危险温度区域的范围。透防冻剂不仅可以保护细胞内部，还可以保护质膜。
　　然蔗糖和PEG是外防冻剂，他们无法渗透到细胞，以取代细胞内的水分，使精子不能保护作为细胞内的防冻液，因此它的活动率低于细胞内抗冻剂。外，虽然各种防冻剂冷冻期间保护精子，它们具有毒性作用，使精子活力冷冻前相比，显着地降低，这也是一个理由影响冷冻效果。有外防冻液后冻结活性细胞内的结论防冻液，它在生产实践中，建议使用细胞内外防冻液防冻液的组合，可以实现高存活率冻结。

　　还保留了完整精子的形态。
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