益智是中国南方的四个主要药物之一：它的种子是顽固的，他们不是对干旱和低温性，不能定期举行。
　　了解决这一难题种子的稳定的长期保存的问题，本研究中使用的难题种子作为材料在种子非常低的温度从的水含量，以优化保存的方法种子和冷冻方法，比较冷冻液氮前后的种子发芽率和α-淀粉酶。氧化物歧化酶活性，过氧化物酶的活性，脱氢酶活性的活性，丙二醛和其他活力指标的内容进行分析，以分析超低冷冻温度的影响液氮对种子的生理生化特性。果表明，直接液氮的冷冻水含量在13.92％~14.38％之间，是益智种子极低温贮藏的最佳条件。液氮中冷冻并冷冻时间延伸到超低温后，种子拼图的发芽率下降76.76％至52.5％，增加至65％，然后下降并稳定在50％以上。子的α-淀粉酶活性首先降低，然后增加，然后再次降低，最后增加并稳定在冷冻前的水平。二醛含量增加然后减少并最终趋于稳定。先降低过氧化物酶的活性，然后稳定在恒定水平。着冷冻时间延长，超氧化物歧化酶的活性继续增加，脱氢酶活性继续降低。上结果表明，液氮的冷冻时间对谜题的活性有一定的影响，但对种子的某些性质有一定的促进作用。

　　
　　芽率和生理生化指标表明，益智种子的液氮冷冻保存是可行的。冻保存，益智种子，水含量，和生化生理特性，种子萌发分类号：Q945文献代码：AA文章编号：1000-3142（2018）04-0529-07Résumé：益智是四一个来自中国，其种子顽拗性种子，它不能被保存在干燥和冷冻的环境中著名的南药，种子益智因此不能定期保留低温低湿条件下的储存条件。决与长期储存和稳定性种子A.益智，我们专注于种子和冻结模式，冷冻保存方法的优化，液氮种子的有效折射率的水分含量以及冷冻保存对生理生化特性的影响。数，包括萌发，α-淀粉酶活性，SOD，POD，脱氢酶，MDA。果表明，A.益智的具有13.92％的水含量，以14.38％的种子通过冷冻液氮后，将种子的发芽率显著降低冷冻保存，但随着冷冻时间的延长，发芽率大于50％。氮中α-淀粉酶和MDA含量活性无显着影响，冷冻后种子脱氢酶活性和POD降低随着冷冻时间的增加，SOD活性增加，上述结果表明冷冻时间对A种子的活力有一定影响。Oxyphylla萌发以及生理和生化指标表明，用液氮保存的A. oxyphylla种子是可能的。键词：冷冻保存，种子益智，含水量，生理生化特征特性，种子的发芽率（益智）是中国南方的四个主要药物之一，属姜科，一多年生草本植物，用作成熟水果和热脾。片腹泻唾液，减少了热的古井肾脏尿液的影响，是中草药中常用的（黄国琦，2013）。子通过种子繁殖的，其寿命较短，后6个月的贮存在室温下或在4℃下，力它的水含量降低至小于10％和活力迅速丢失种子低于45％（Zeng Lin et al。2015）。），不应存放在低温低湿的常规方法中。

　　图种子可归类为顽拗型种子，因为拼图种子无法干燥并在低温下储存（Roberts，1973）。比，在原位和易地保护的传统的方法，冷冻保存是用于长期储存，稳定和有效的药用植物顽拗性种子（罗伯茨，1975），在氮非常低的温度最适合的方法液体（-196°C）。环境中，植物种子的所有细胞和代谢分裂活动几乎停止并处于相对稳定的生物状态（Wang等，2015）。氮的极低温储存对种子活力和萌发有影响，但也影响生理和生化指标（Byron等，2013）。Cejas等人。（2013）发现，冷库安装作为超低温储存后的恢复实验的一部分，豆荚在极低温度下冷冻后的酚醛含量和醛含量蛋白质含量下降。研究还表明，可溶性蛋白质含量，过氧化物酶（POD）的活性和在玉米种子超氧化物歧化酶菊花尖端（SOD）的在非常低的温度下冷冻后的活性均减少（Song Hong et al。2016，Cheng Zhiying，2006）。冻保存后的在菊花杆金孢菌丝可溶性糖，POD活性，可溶性蛋白质含量，可溶性糖含量，SOD，POD活性，可溶性蛋白含量和（MDA）丙二醛内容的内容既增加（程Zhiying，2006，Wang Gengliang，2011，Liu Xiaodong et al。2013）。此，应在超低温下长期储存植物种子之前测试这些指标。篱嗯和他的同事（2015）在液氮中的益智种子冻存进行实验性试验，并且已经证明，冷冻保存在液氮中的益智种子是可行的。
　　而，目前还不清楚益智种子的生理生化指标是否在冷冻保存后发生了变化和变化。研究优化了益智种子的超低温贮藏方法，并对种子发芽率，α-淀粉酶活性，脱氢酶活性，活性进行了优化。氧化物歧化酶，过氧化氢酶的活性，丙二醛的含量的过氧化物酶活性和变形例中，以解释在非常低的温度对生理生化特征拼图种子冷冻的影响，并为保护遗传物质资源提供技术基础。料和方法拼图成熟种子收集在水满的水蛭，五指山海南省州新村里，有18.64％的初始含水率和初始发芽率85％。4℃下保持的方法冷藏测定水分的种子种子被放置在干燥器中含有的硅胶和为0，6，10，14，20，24，这取决于32干燥1h初始含水量和预期干燥速率（何英虎等，2013）。到具有18.64％，16.39％，14.38％，13.92％，12.29％，11.55％和10.36％的水分含量的实验的种子。据用于种子检查，第六章（GB / T 3543.6），低温干燥法的国家规则[（103±2）℃]被用来和16小时的干燥处理，种子的含水量后确定了。种子在超低温冷冻和干燥的种子被分为四组，一组为对照组，直接发芽或生理生化实验，其他三组用于用液氮冷冻。该实验中，冷冻保存实验难题种子通过缓慢冷冻，快速冷冻的方法和冷冻的方法进行玻璃化的方法得到的最佳条件为冷冻超低温拼图种子。（1）缓慢冷冻组：将种子置于与冷冻保护剂PVS2（室温）下，在冰箱中放置一个离心管，在4℃0.5小时，并立即输出在-20℃下冷冻1小时，1小时后。速放入液氮罐中。（2）直接冷冻组：冷冻储存管，种子直接置于液氮中冷冻。（3）玻璃化冷冻组：精液置于冷冻管与液体LS加载并在室温下20分钟后，充电液体倾，加入冷冻保护剂PVS2并放置在冰30分钟，然后换成新鲜的。冷却PVS2（0°C）并快速放入液氮罐中储存。冻保护剂（PVS2）由30％甘油 15％乙二醇 15％二甲亚砜 0.4摩尔·L - 1个蔗糖，加载溶液（LS）为2mol·L -1 MS液中甘油 0.4mol·L-1蔗糖。冻和发芽后，冷冻氮种子用US洗涤溶液中5分钟，取出，在40℃的水浴中解冻5个min.Les玻璃化种子和缓慢冷冻洗涤3次每次，然后用无菌水洗涤。2次，每次10分钟。洗涤过的种子与滤纸上的水的表面吸干，转移到用于培养发芽箱，放置在人工气候培养箱（25-30℃），且滤纸的在表面发芽箱保持湿润。天监测和记录种子发芽。子的生理生化指标，从对照组和冷冻组最佳取50小时，1天，7天，为30J，为30J，为30J，60j的，90焦耳，180Ĵ，365Ĵ，分别。24小时后，确定了以下指标。
　　α-淀粉酶的活性是通过比色法与3，5-二硝基水杨酸（DNS）法（王Lina等人，2009）确定;蓝氮四唑对脱氢酶和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。法（NBT法）（李和生，2000）;使用愈创木酚法测定过氧化物酶活性（POD）（张淑珍等，2012）;使用硫代巴比妥酸的丙二醛（MDA）含量（Zhang Huiru，1999）测定。据分析和发芽种子拼图的数量的统计，发芽率根据下列公式计算：发芽率=发芽的种子/籽实验×100％数目的数目。过ANOVA和使用SAS 9.3软件的多重比较分析酶活性和发芽率数据，并使用EXCEL软件（2016）提取。对种子发芽率的表1非常低的温度冷冻的结果和讨论的影响表明，种子发芽率的不与液氮中冷冻拼图随水含量并且所述速率降低在非常低的温度下冷冻后，益智种子的萌发随着含水量的增加而降低。先起床然后减少。
　　相同含水量下，冷冻前种子发芽率明显高于冷冻后种子发芽率。表明拼图种子不耐脱水和低温，并根据其储存特性进行分类。智种子是顽固的种子。接冷冻组不同含水量种子的发芽率显着高于慢速冷冻组和玻璃化冷冻组。水含量为13.92％和14.38％之间，冷冻种子的发芽率三组比其他类型的水含量，并直接冷冻的组种子发芽率的高大于52％。报道，13.92％的水含量，以14.38％是用于保存在puzzle.La种子的非常低的温度的最佳范围直接冷冻方法是非常保留的最佳冷冻方法低温拼图种子。非常低的温度对种子发芽率冷冻时间从理论上讲，一旦植物种子已在-196℃下被成功地冻结的效果，在液氮中的种子的贮存寿命可以延长到无穷大（Sakai等，1990）。1和表2表明，冷冻0小时，1天，7天，为30J，为30J，60j的，90焦耳，180Ĵ，365在j之后的幼苗萌发率，延伸与所述在非常低的温度下冷冻时间。在第一位后，然后上升和下降，最后趋于稳定。结7天苗发芽率降低显著较前congélation.Le种子发芽率后7天90天congélation.Après冻结缓慢增加，发芽率开始下降。180天后，发芽率变得稳定。然在超低温冷冻过程中拼图种子的发芽率有所增加和减少，冷库安装但总发芽率大于50％。冻保存的对种子的生理和生化特性的影响示于图2和图2.用的冷冻保存的时间的延长，在益智种子α淀粉酶的活性有所增加，并且最后，冻结之前没有差别。智种子中的丙二醛含量先增加后减少，然后稳定，表明极低温贮藏对种子的可溶性糖和MDA含量几乎没有影响。题。

　　
　　SOD幼苗的活性与冷冻保存的时间的增加，这表明该冷冻液氮的刺激下，种子捕集自由基的能力增强显著增加，这使得它们能够抵抗氧的活性物质，并且自由基抗氧化能够激发它们的活力。糟糕了。着冷冻保存的时间，POD益智种子的活性下降并稳定，表明种子已经通过在非常低的温度冷冻和使活性氧含量损坏种子增加，减弱了抗氧化能力，降低了活性。90天后，它趋于稳定：可以用液氮冷冻90天，种子的内部过氧化物酶活性达到临界点。非常低的温度下，随着冷冻时间的增加，种子的脱氢酶活性显着降低，液氮的冷冻降低了种子催化的氧化还原的酶活性。论和结论冷冻保存技术涉及在液氮温度下冷冻植物遗传物质以使细胞保持完全无活性状态。
　　论上，如果良好的冷冻保存系统可以是在适当位置，并且大部分细胞可以冷冻用液氮植物的遗传物质之后被重新激活，所述植物的遗传物质可以无限期地保持在液氮（程志英，2006）。子含水量和超低温冷冻方法是影响种子冷冻保存系统建立的主要因素。子的含水量是否过高或过低都会对种子造成严重损害（曾林等，2014a）。子不能通过冷冻良姜种子的水含量范围appropriée.La最佳含水量为在非常低的温度下冻结的适当的方法可以有效地冷冻保存是12.78％至13.58％最佳冷冻方法是玻璃化（Zeng Lin et al。2014b）;种子Baimuxiang适于在非常低的温度下以7.35％的适当的水含量冷冻，冷冻方法是直接冷冻法（刘俊民等人，2007）;黄檀玉竹种子的超低温冷冻箱适于10.54％的水含量至12.35％，冻的方法是玻璃化（曾梨嗯等人，2014A）。究结果表明，益智种子的超低温贮藏系统含水量为13.92％~14.38％，采用直接冷冻法。
　　氮主要影响种子的发芽率和生理生化指标。粉酶是用于早期种子萌发快速引入能量代谢的基本保证，是新鲜的萌发graines.L'a淀粉酶的重要生理基础是一个重要的水解酶淀粉酶（赵玉金，王泰，2001）。究结果表明，随着液氮冷冻时间的延长，拼图种子的发芽率略有下降，但均超过50％，超低温冻结对益智种子的α-淀粉酶活性几乎没有影响。

　　SOD，POD和脱氢酶是重要的保护酶对植物种子，提供了有效的和特定的系统脱氧植物细胞（钱轰仡，2009），其活性是从公差分不开到非常低的温度植物种子（宋红等）。2016）。SOD是一种特异于种子细胞自由基清除系统的抗氧化酶，它与种子对温度的抵抗力有关。亮王（2011）中的胚发生冷冻液氮后SOD活性的冷冻保存实验悬浮细胞中发现了提高，这是与本实验的结果一致，表明冷冻液氮提高了种子捕获自由基的能力。助于抵抗活性氧含量的增加，减少超低温对种子活力造成的伤害。红等。（2016）发现在液氮冷冻实验中观察到用液氮冷冻后宿主种子的POD活性。英诚（2006）和王更亮（2011）观察到菊花花泡的胚胎细胞的杆端部的非常低的温度下冷冻，从而增加POD的杆两端的活动菊花和球茎的胚胎细胞。实验的实验种子的POD活性与液氮的冷冻时间的伸长率下降，表明种子的抗氧化能力，通过冷冻液氮的刺激减弱。氢酶活性与种子活动的强度显著相关（封侯Shi等人，2005）：幼苗发芽速率随着液氮冷冻的时间减少而种子脱氢酶的活性却下降了。低温下冷冻时间的延长显着下降，表明脱氢酶活性与种子发芽率呈正相关。二醛是一种产品基于膜过氧化物，其抑制细胞保护酶和降低抗氧化剂水平（钱轰鬲，2009;汤租军明和Song，1999）的活性。

　　小东和他的同事（2013）发现，冷冻保存在液氮原球茎铁皮石斛增加在原来的灯泡铁皮石斛MDA含量。图种子的MDA含量已首先冷冻液氮后升高，表明细胞膜作物的过氧化在冷冻过程后，在非常低的température.Toutefois增加冷冻保存90天后，益智种子的MDA含量开始下降，直至变得稳定。着冷冻保存时间的延长，拼图的种子细胞的活性逐渐停止并达到生态稳定状态。冻保存方法的成功通常通过使种子在一定期间（汤纯林Anjum和龙，2007年）用液氮处理的事实来确定。究结果表明，液氮的冷冻时间对谜题的活性有一定影响，但对种子的某些性质也有促进作用。芽率和生理生化指标表明，益智种子的液氮冷冻保存是可行的。
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