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[冷库安装]闭合切割法在睾丸精子冷冻保存中的应用

2019-07-20 / Published in 行业资讯

  目的检测闭合截面的冻结阻塞性无精子症(OA)睾丸精子的效果,以提供冷冻保存精子单的简单且有效的方式在患者的非梗阻性无精子症( NOA)。法对15例骨关节炎诊断生殖和生殖医学中心在大连六月和2016年12月间被选为主题:睾丸精子冷冻保存冷冻保存通过关闭叶。冻冷冻的复苏睾丸精子(组冻结)后,在体外成熟卵(IVM)进行内单精子注射(ICSI)。算它们的受精和卵裂率,以及新鲜的睾丸精子(新鲜组)。较ICSI以评估解冻后睾丸精子的受精能力。

闭合切割法在睾丸精子冷冻保存中的应用_no.322

  
  冻组和新鲜组均为15例以上患者。果睾丸精子采用封闭叶片法冷冻,解冻后恢复率和存活率较高(92.00%,65.94%)。冻组和新鲜组具有相似的受精率(56.00%对70.66%)和卵裂率(97.44%对95.83%)。组之间无显着差异(p> 0.05)。论玻璃化封闭片能有效地保持在骨关节炎患者的睾丸精子和具有高的受精能力的复苏sperme.Elle构成用于在单个患者NES精子的冷冻保存实验依据后。丸精子冷冻保存,无精子症恢复[分类号] R321.33 [文献代码] A [编号] 1674-4721(2017)08(c)中-0019-04 [摘要]目的研究该方法的效果叶阻塞性无精子症(OA),以提供用于睾丸精子的患者非梗阻性无精子症的个体数的简单而有效的关闭冷冻保存对睾丸精子(NOA )。法15人被确诊患有由六月生殖医学大连遗传中心骨关节炎至2016年独特的睾丸精子与封闭的片材的方法冻结十二月,我们比较分裂的速度和ICSI后的生育率个体数之间睾丸精子冷冻和解冻与未成熟的卵母细胞和冻融睾丸精子的受精率的体外成熟精子进行了评价。冻和新鲜组均从15例以下dessus.Résultats个人数字睾丸精子有回收率和生存能力的与所述封闭板的方法更高的速率(92.00%,65.94%)。育率(对70.66%56.00%)和裂解率(%97.44 95.83对%)睾丸冷冻精子类似了新鲜精子ICSI后并没有表现出显著差异(p > 0.05)。论冻融睾丸精子具有较高的受精能力。闭片材的方法是有效的冷冻保存在arthrose.Cette患者研究的各个数字睾丸精子奠定了患者的NOA临床应用单个精子冷冻保存的实验基础。[关键词]睾丸精子的个体数量;冷冻保存;无精子症;与桶盖回收率等人[1] 1953年成功地针对精子,精液冷冻技术已经成为目前的发展更成熟的人超低温保存,可被用作用于辅助生育常规手段不孕患者。而,对于无精子症患者睾丸精子的冷冻保存,特别是在患者的非梗阻性无精子症(ANS),冷冻保存精子的常规技术往往不产生令人满意的结果。2]为避免因取卵当天睾丸精子取出失败而取消检查,并避免重复睾丸活检对睾丸功能的损害,重要的是冷冻保存睾丸微精子甚至简单的精子。作者先前的研究中,使用闭杯法从正常精子样本中冷冻精子是成功的[3]。后经过研究解冻和受精能力应用这个方法在骨关节炎患者睾丸精子的冷冻保存和观察到的精子的相关指标,奠定中临床应用的独特精子冷冻保存的实验基础ANA患者。料和方法研究对象为15例骨关节炎谁在2016年十二月接受了睾丸活检男性诊疗中心六月剩下的精子被用来作为活检样本选择。
  中两人有睾丸炎病史,另外一例是原因不明的无精子症。关节炎的诊断标准是后可以睾丸精子提取(TESA)后可以观察到精液离心和精子的三次注射精液,未观察到。有患者的染色体检查均为46,XY(3例小Y,1例大Y),性激素均在正常范围内。外成熟卵(IVM)源自同时的胞质内精子注射(ICSI)技术的循环。

闭合切割法在睾丸精子冷冻保存中的应用_no.85

  研究得到了大连市妇女儿童医学中心伦理委员会的批准,患者签署了知情同意书。究方法获取精子TESA如果(10)在ICSI周期中获得未成熟的卵子的数量,男医生被告知,TESA活检第二天早上进行,该标本活组织检查(新鲜组)直接与IVM Ovum ICM一起使用;部分冷冻保存,然后解冻(冷冻组)ICSI IVM卵。活检的具体步骤如下:系统的皮肤消毒,用5毫升注射器培养基少量的吸入,穿孔在睾丸通过阴囊皮肤,针刺针管的穿刺获得一点睾丸组织,送到实验室睾丸,并在显微镜下提取1毫升注射器。离生精小管,干净的2倍在G-MOPS加(Vitrolife)消除尽可能红细胞,混合并数次用移液管混合,/吸入离心管中,离心分离机以1000转min离心5分钟并保持。紧,在孵化器中孵化并放在一边。
  冻支持物制备冷冻介质由手工切割的聚丙烯片和常规的精子冷冻管组成。体结构可以在文献[3]中找到。

闭合切割法在睾丸精子冷冻保存中的应用_no.189

  胶制备和复苏精子:50个微升液滴长成样品杯(BD FALCON 1006)覆盖有矿物油,离心5升移液管克星的,然后在的下端沉积下降。37°C预热5分钟。冻过程:使用显微操作系统(RI-Integra Ti)在精子液滴中收集10个活的精子。冷冻薄片置于100mm培养皿(BD FALCON 3003)中,移液管含有1.0μl。HEPES缓冲液10%人血清白蛋白加入到冷冻叶的前部,而将注射针迅速掉进冷冻液滴和吸入精子注射到微滴和冷冻切片用无菌镊子立即在精液中冷冻。管中,拧紧螺母并在液氮上方1厘米处熏蒸2分钟,然后将其置于液氮中储存。苏前的准备:将3毫升矿物油倒入培养皿(BD FALCON 3001)中,置于37°C培养箱中进行警告。种用于复苏过程:冷冻管精子从液氮取出,螺母拧松,将冷冻的片材被夹持用镊子且迅速地在37℃下浸渍于矿物油中进行复苏。37°C的培养箱中孵育5分钟,并在复苏后评估精子。子复苏后相关指标的评估在解冻和复苏后评估精子取出,活动率和存活率。
  体评价方法如下:精子回收率=回收精子数/冷冻精子数;精子活动率=(向前移动的精子数量 未向前移动的精子数量)/恢复的精子数量;精子存活率(低渗肿胀试验)=尾部包裹的精子数/恢复的精子数。数排卵和采集使用长期图案,长图案和短方案[4],超排卵的卵其中≥2优势卵泡的直径为20毫米,冷库安装人绒毛膜促性腺激素的注射(HCG )10,000 IU,36 h后,阴道超声B引导穿刺和取卵。IVM卵收集,受精和卵裂条件从卵收集中去除第一周期ICSI颗粒细胞后,一旦检测到MI或GV阶段,转移至G-IVF-培养基。多(Vitrolife)培养过夜。二天早上观察到极体的排出,如果第一个极体卸载,它可以用于ICSI。
  冻组中的精子选择:解冻后,选择ICSI用于正常或不移动的精子,在低渗肿胀试验后,选择尾部弯曲的精子用于ICSI。鲜组精子选择:选择ICSI正常动作精子线。ICSI的具体步骤按照中心的惯例进行。ICSI后16-18小时观察受精条件,标准受精标准是双原核(2PN)。ICSI后40至42小时观察到切割,并且认为切割发生在超过2个细胞中。计方法采用SPSS统计软件18.0进行分析,计数数据用速率表示。过测试2分析比较。
  异在统计学上显着,p <0.05。果复苏睾丸精子后,患者的活性精子相关指数之后TESA分别为92.00%(一百五十〇分之一百三十八)和16.67%(138分之23)表示。65.94%(91/138)。精率,2NP水平和两组之间的卵裂率无显着差异(P> 0.05)(表1)。论ICSI技术,遗精显微解决了患者的无精子症最生育问题,但对于NES患者的精子首次成功恢复后,总有失败的风险30%再次手术[5],因此在第一次活检中发现的睾丸精子的冷冻保存是必要的。管Bung等人已成功研究了人类精子冷冻技术。[1] 1953年并且常用于辅助生殖领域,NOA患者的睾丸精子由于采集量低而精子数量少,精子成熟度低。于诸如技术差的原因,常规精子冷冻保存技术通常不满足冷冻保存的要求。此,找到了精液或甚至单个精子的冷冻保存迹线的合适的冷冻方法已成为辅助生殖技术来解决的问题。着玻璃化技术的发展和进步,人们越来越认识到,精子可以通过玻璃化冷冻和玫瑰[6-9]。有的研究资料表明,国内外研究者正在使用的冷冻方法透明带空,[10] [11]冷冻的方法,所述微微管法[12],所述针的方法ICSI [13],冷冻薄膜和休眠细胞方法[7]。],极地活检针法[14]和其他冷冻保存精子痕迹的方法。据不同的冷冻方法,精子恢复后的恢复率可达59%~100%,存活率可达8%~85%[14]。而,由于可操作性差和低存储安全性,上述方法难以在临床上常规应用。

闭合切割法在睾丸精子冷冻保存中的应用_no.661

  过去,我们尝试使用闭合切片法从正常精子样本中冻结精子并成功[3],这大大提高了冷冻和储存安全的可操作性,并取得了较高的恢复和存活率。此同时,冷冻保护剂冷冻效果和精子的脚步没有冷冻保护剂进行了比较,结果表明,两者有冻结的类似的效果。该研究中,该方法然后应用于睾丸精子的冷冻保存,并且使用没有冷冻保护剂的玻璃化方法来获得更高的精子恢复和存活率。当指出的是,解冻和复苏后睾丸精子的参与率非常低,所以实际上在movement.The活性精子无精子的特征在于,尾部的偶尔轻微摆动应在显微镜下长时间仔细观察。原因在于,首先,因为睾丸精子在附睾没有遭受新的成熟精子细胞膜不完全成熟,防冻能力较差。次,通过TESA获得的睾丸组织与血细胞的少量和大量的杂质,冷库安装混合如死精子和睾丸精子缺乏精浆的保护,这导致的片段解冻后的霜冻损害和活动能力。日,国内外刊物报道了睾丸[15-16]解冻新鲜的冷冻精子后qu'ICSI可以得到临床妊娠率与睾丸精子受精和类似率率。而,很少有报道冷冻和解冻睾丸精子家庭和étranger.Malmesly等[10]和Endo等[7]已成功地冻结睾丸精子和ICSI后的结果实现更高的受精率和卵裂率。项研究的结果表明,冷冻精子被封闭部分的方法冷冻精子仍然有较大的解冻后受精能力。新鲜睾丸组相比,冷冻组受精率低于新鲜组,但两组受精率较低。在clivage.Nos实验结果率无统计学差异显著分别与国外报道除了基本一致,因为大多数睾丸精子复苏后冻结,如何选择固定的精子ICSI对临床结果特别重要。ICSI的睾丸精子不动的应用的临床应用已有报道在国内外[7.17〜18]在这项研究中,ICSI已通过选择正常的精子选择或低渗肿胀试验后的精子。用ICSI方法注射IVM卵,获得更高的受精率和卵裂率。研究首先探讨了闭合叶法在精子中应用精子的可行性。于NES患者很难获得精子和是非常有价值的,本研究试图用睾丸精子骨关节炎的实验样品,用封闭片玻璃化冷冻,并得到恢复率和复苏后精子存活率较高。精和卵裂率与新鲜睾丸精子相似。然骨关节炎患者精子质量可能不等于患者NOA,这项研究的结果对患者的临床应用单精子冷冻保存奠定了实验基础提出NOA。
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