随着基因工程技术的飞速发展,转基因小鼠的收购变得更容易。何保护这些资源的鼠标提供高品质已成为一个重要的问题。子冷冻保存是指维持精子的极低温度的过程中,减慢或停止其新陈代谢,并继续在一次正常的生理温度恢复增长。标精子冷冻保存方法已广泛应用于国外实验动物,因为它的操作简单,冷库安装经济和它的后代产生潜在的多中心,但该中心采取宠物平时生活小鼠的保护的传统方法。于生活的保存方法是很不经济的,有那么容易动物污染源和珍贵的线条容易流失的潜在风险。
着基因工程技术的飞速发展,转基因小鼠的收购变得更容易。些高品质的鼠标资源的保护已经成为一个重大问题。
切需要。标保鲜方法主要包括生活保存胚胎冷冻,冷冻卵子,精子冷冻,冷冻精子等。
前,胚胎冷冻和冷冻精子[1-2]。而,因为大的头,长尾状镰小鼠精子的,它是引起霜冻机械损坏很敏感,和鼠标组成的质膜是低特别耐公差霜冻渗透压[3-4]],凝固后的存活率和小鼠精子恢复是非常低的。了通过Nakagata [5-8]发明“冻结Nakagata的方法”。
然Nakagata冷冻保存方法对小鼠具有的某些菌株的冷冻保存精子的正效应,C57BL / 6的精子,BALB / C小鼠近交系和其它广泛应用在实验室通过Nakagata冻结。存和受精率都高于封闭式和混合小鼠[3,9]低得多。
近交系小鼠精子冷冻实验室中常用的C57BL / 6已成为转基因小鼠的选择目前强劲增长的瓶颈,也是一个热点,在国内和国外。此,建立和冷冻保存技术小鼠精子的优化相关线路,如C57BL / 6是生物医学研究发展的迫切需要。于Nakagata冷冻法,我们指的是“老鼠胚胎的手册 - 第三版”,熊本大学,日本和下列文件的CARD中心:三种类型的冻存液中被用来比较三种冷冻解决方案。
冲器3:18%棉子糖,3%脱脂奶粉,1.46%L-谷氨酰胺,溶解在水浴中,以13,000 g离心15分钟,通过过滤器过滤0.22 μml并储存在-20℃下的搜索结果,我们使用了三种不同的解决方案,为冷冻保存(缓冲器1,缓冲器2,冷库安装Buffer3)快速纯化菌株C57BL / 6和16周的老年男性。个月后,将小鼠精子恢复并在vitro.Le第二天受精,双细胞胚胎的数目的比例表示,在体外受精(IVF率)的效果进行比较统计。了,施肥的平均效率接近60%,已达到国际先进水平。
1和3均不理想。外,我们还使用了垫2以冷冻精子FVB小鼠应变和应变BALB / C.复苏后精子FVB品系的体外受精的有效性可以达到90%或更多和体外受精平均应变小鼠的BALB / c的精子复苏后效率也大于50%。
冲器2对应于加入的硫代甘油0.004%在冷冻保存溶液总之所述基部,所述缓冲器2是优异的冷冻保存溶液精子适于几个自交系。外,研究已经显示的自由基,胆固醇,环糊精,表面活性剂,抗冻蛋白等,其加入清除剂在冷冻溶液可以一定程度上提高小鼠精子的防冻液能力。冻保存溶液也可以被最优化。
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