为了鉴定在罗非鱼的肠道和各道的分配的M型细胞中，由透镜凝集素所观察到的前肠，肠和后肠罗非鱼直接免疫荧光显微镜（UEA -1）用FITC标记。
果发现，在前肠，肠和后肠罗非鱼观察M-样细胞，M型细胞在肠和后肠的数目是显著更高而不是前肠。疫组中M细胞数明显高于空白对照组，免疫组中前列腺细胞数量明显多于肠道组织。究表明有免疫组织中M细胞数量明显多于空白对照组。M型细胞中前肠，肠和tilapia.Après曝光后肠抗原减毒无乳链球菌在肠道的数量和单元的分布均modifiés.Il是以前报道M型细胞参与肠道免疫应答。非鱼M细胞，UEA CLC：S917; S942.5文献标识码商品编号：1002至1302年（2015）09-0264-03陈，博士，副教授主要从事研究水产疫苗和immunotechnology通信。子邮件：cm990919@163.com。年来，罗非鱼养殖已成为链球菌越来越重要的在中国：治疗不能有效对抗疾病，但容易产生耐药性，污染环境和现在粮食安全风险[1]。苗预防是控制疾病的最有效方法之一。中，该疫苗具有良好的免疫效果和较长的保护期，但操作尴尬，难以在实际生产中大面积推广应用[2]。服疫苗使用方便，对鱼类的危害很小。用于大规模接种鱼类，但其免疫保护率低，保护期短[3]，主要原因是罗非鱼肠粘膜细胞的吸收，吸收和表现。原是有限的。此，有必要研究鱼体内肠粘膜抗原的表现。在肠粘膜的上皮一种特殊类型的M型电池，也被称为微皱褶细胞[4-5]，它是肠道免疫组织的主要效应细胞吸收微生物或抗原和刺激肠道。
部免疫反应的主要门户。们普遍接受的是，M型细胞可有效地摄取和在肠腔运输各种大分子和抗原至淋巴结上皮下的免疫细胞，然后处理和呈递抗原，从而激活B淋巴细胞和淋巴细胞特定于T。年来，肠道免疫反应的研究表明，大多数口服疫苗必须由细胞类型男，这是关键，许多细菌和病毒发病机制及粘膜疫苗[6]被吸收，他们的吸收效率决定了疫苗的免疫效果。前，M型细胞存在于与人，鸡，兔，大鼠，猪，牛，猴，狗等的淋巴组织相关的表面上皮中。[7-8]。鱼类中，只有虹鳟鱼有M型细胞[9]，还有其他一些没有报道过。该实验中，由前肠，肠的直接免疫荧光和后肠罗非鱼染色是由透镜凝集素进行（UEA-1）FITC标记的发现在罗非鱼肠道形态上类似于哺乳动物微米。胞样分布和分布为进一步研究罗非鱼肠道M型细胞摄取和呈递抗原机制以及开发针对S的口服疫苗提供了理论依据。乳。料和方法材料试验鱼罗非鱼养殖场的测试，以捕捞广西，平均体重250〜300克科学院，分为2组，每组20场比赛，在一个大木桶600举行在中间，24小时被氧合并在28±5℃下维持2周以适应食物环境。3天更换一次水2/3。天喂食两次（上午9点和下午4点）。日食物量是鱼体重的2％。试试剂凝集素荆豆（FITC）购自Sigma和胎牛血清是从浙江天杭生物技术有限公司购买，DMEM被自Gibco和斑块购买豫血液从郑州安图绿TSB培养基购自杭州微生物试剂有限公司，从实验室获得无乳链球菌YM001的减毒菌株被购买，其他生物和化学试剂均为分析纯产品从商业公司购买。验方法的疫苗的制备减毒在-80℃下从血液板除去无乳链球菌YM001的应变和24个小时，然后转移到TSB介质中扩张后对血板复兴。10，000 rpm离心120 mL溶液10 min，弃去上清液，加入20 mL PBS，用喷壶均匀喷洒于120 mL食物中。细胞风干5分钟并导入免疫组，空白对照组在没有减毒株的情况下进食。食3小时后取样。样取白色对照鱼的肠，然后取免疫组的肠道。活鱼的剖腹术后，肠道的前部，中部和后部迅速采集，约4厘米。胃中的后端和肠的第一曲率之间的中间的前眼部进行采样，所述中心段在第一中间采样到肠，后段的最后一个帘布层中的中间至少肛门的最后一次折叠[10]。
冷冻切片制备样品用PBS洗涤3次，并将滤纸缓冲;将其快速置于4％多聚甲醛溶液中，在4℃下保持1小时。10％FBS细胞培养基冲洗3次，吸滤纸并立即在液氮中冷冻1小时以上。样品取成0.3cm×0.3cm和0.3cm厚的小片，包含在带有OCT的锡箔罐中，并放置所包含的组织在冷冻切片机中切割冷冻的Leica CM3050切片机，厚度为5μm。用抗损耗叶片和保持在4℃下染色和观察通过免疫荧光冷冻切片在37℃下置于FITC-UEA-1（1:80）中的溶液1小时，并用PBS各3次，每次5分钟，滴加少量50％PBS甘油溶液。载玻片置于荧光显微镜下，确定肠上皮组织中的绿色荧光为M型细胞。果和分析如图1所示，M型细胞为在免疫组的前肠，肠和后肠和空白对照组观察到的，在数量方面，无论免疫组或空白对照组，中肠和后。道中M型细胞较多，前置放大器较少，M型细胞主要集中在中肠和后肠。疫后，M型细胞的数量显着大于空白对照组的数量，并且前置放大器的数量显着大于空白对照组的数量。论抗原的成功粘附和M细胞的摄取是粘膜免疫应答的关键，其主要依赖于表面细菌凝集素与表面表达的糖基的相互作用。细胞M.细胞膜中的H型的表面覆盖有（UEA-1）岩藻糖在糖蛋白，其可以由透镜凝集素特异性识别和结合的[11-12]，从而表明UEA-1可以作为识别M型细胞的特定指标[13-15]。Chen和同事使用标记的UEA-1的FITC和胶体金颗粒（10nm的）观察M型细胞的形态与毛囊有关Peyers的上皮细胞，在小鼠小肠正常，并通过荧光显微镜和免疫透射电子显微镜观察。经表明UEA-1特异性识别M型细胞[16]。前的报道表明骨鱼中没有M型细胞，但是最近的研究表明M型细胞与哺乳动物M细胞的第二肠段中的哺乳动物M细胞相似。鱼的中肠。Fuglem及其同事使用的WGA UEA-1和rho-非Damine FITC标记的观察彩虹虹鳟鱼的第二肠段，发现只有UEA-阳性细胞具有M型细胞的特征在哺乳动物中[9]。这项研究中，用UEA具体方法1. M型细胞在罗非鱼的肠，这清楚地表明M型细胞的存在成功地观察到相关联的FITC也检测到M个小区在罗非鱼的前肠，中肠和后肠。电子显微镜和胶体金组织细胞识别方法相比，整个实验过程仅需4小时，冷库安装具有以下优点：执行速度快，步骤简单，保存方便。织抗原，灵敏度高，冷库安装特异性强，结果可靠[17]。
的肠上皮细胞并不像在哺乳动物中派尔淋巴节，但也有相当多的细胞，研究表明，鱼类细胞主要分布在肠道的后部。18]陈杰及其同事观察到，用Ty21a活减毒Ty21a疫苗免疫小鼠后疫苗诱导M型细胞数量增加[19]。
佳利用免疫荧光检测小鼠肠道M细胞中口服Ag85A DNA疫苗的表达，发现Ag85A DNA疫苗在小鼠M细胞中表达。鼠肠道和DNA疫苗可以被肠道的M细胞吸收[20]。吁丈和对肠道肠道罗非鱼的形态和免疫细胞黄芪多糖的效果的其他研究表明，在同一组肠上皮内淋巴细胞的数量是在肠道中最高中，接着是后肠和前肢[21]。外，在同一组的不同肠段中，罗非鱼肠道中粘液细胞数量的顺序为中肠>后肠。
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