目的寻找进一步预处理同种异体肌腱的新方法，以提高其修复效果，为临床应用提供实验依据和理论依据。法采用超深低温保存法获得异体兔腱。碳二亚胺，以检测组织相容性，肌腱的交联基团和未固化的交联的肝素在兔跟腱受伤。行修复以观察和比较两组在不同时间的胫骨愈合情况。EDC交联基团的步骤（I II）的炎性反应结果比非交联基团（III IV），差异有统计学显著（p值分别为0.020至0.030，）打火机;在移植实验中观察到交联。素腱具有愈合伤口修复更好的能力，非交联的肌腱和纤维Sharpey出现较早跟腱，从而缩短了时间到胫骨的愈合。论肌腱的治疗冻结超低温和交联EDC提高了稳定性，降低了同种异体肌腱的免疫原性和促进腱和骨的愈合。种异体肌腱，超深低温冰冻，碳二亚胺移植[分类号] R686.1 [文献代码] A [编号] 1674-0742（2015）03（a）中的经验-0016-04Etude兔腱移植通过超深度冷冻获得与EDC / NHS修复肌腱伤到大连市，辽宁省大连市，116000的AchilleFANG博元CI宗GangSeconde人民医院进行交联，中国[摘要]令牌提高通过进一步预处理同种异体肌腱修复效果，为临床应用提供实验依据和理论依据。法采用超深冷冻冷冻法制备兔腱同种异体移植物，然后用EDC / NHS进行交联和肝素化，检测组织相容性。跟腱的注射用管理和管理无效修复肌腱移植物，其目的是观察和在时间序列différent.Plus对比两种骨肌腱愈合仅1至4周，差异有统计学意义（p值为0.020至0.030）;移植表明，肌腱移植管理的凝集能力更强大Sharpey的纤维外观的时期是早期和交联和肝素化的过程可以缩短肌腱和愈合时间结论超深冻结肌腱移植和EDC / NHS交联增强了其一致性，降低了免疫原性，促进了肌腱骨的愈合。[关键词]同种异体肌腱;超深冻结;碳二亚胺;移植目前导致运动损伤和交通事故引起的跟腱损伤数量显着增加。要采用自体重建肌腱移植物。
　　于自体肌腱提取和自体组织的有限来源引起的一定程度的侧向损伤，同种异体肌腱研究迅速发展。功的同种异体肌腱移植的关键是如何降低或抑制移植物的抗原性。这个实验中，肌腱深超低温保存和碳二亚胺的应用处理，探讨减少异体肌腱的抗原性的可能性进行进一步的临床研究奠定了基础，如下图所示。验方法2011和2013。

　　

　　西兰白兔之间进行同种异体肌腱的制备经验进行称重，并用静脉内戊巴比妥钠30毫克/千克，兔腱麻醉是在无菌条件下服用并重复盐水。没的新鲜肌腱置于含有10％二甲亚砜和纯小牛血清，在室温下平衡，置于液氮罐6小时的冷冻保护剂，然后在液氮中浸渍3个月。苏：在40℃下，含10％FCS的RPMI1640溶液在水浴中快速升温来除去防冻剂，在室温下浸泡在3％的过氧化氢为3小时，并洗涤反复用蒸馏水3次，30分钟/小时。
　　其在氯仿1：1和甲醛的混合溶液中脱脂4小时，并用蒸馏水反复洗涤3次，每次30分钟。真空下冷冻干燥，用环氧乙烷消毒。联的同种异体肌腱和在MES缓冲液中浸泡50毫摩尔/ L 24小时肝素化的腱，用EDC交联（含有50mmol / L的MES 5毫摩尔/ L EDC，5毫摩尔/ L NHS，40％）的制备乙醇），6小时在室温下固化的，用95％乙醇进行2×30分钟/小时水洗，然后用PBS漂洗两次24个小时，并用Hepes缓冲液冲洗4次后，20分钟/小时。真空下冻干后，将环氧乙烷灭菌以备使用。疫原性实验：选择40只雄性Sprague-Dawley大鼠并称重（250±20）g。实验前剃去背部，定期灭菌，并通过腹膜内注射0.35ml / kg水合氯醛接受麻醉的动物。验分为两组，每组20个。的两组均包括在每个组中皮下（一组用EDC交联，两组非处理组）和伤口用3-0丝线缝合儿子和敷料定期更换。
　　只大鼠通过在干预和葬礼的皮下组织活检的第一和第四周颈椎脱臼处死是在大鼠中进行，并通过HE染色观察接枝大鼠的免疫应答。观察到的炎症反应的分类[1]所述的I级显示样品周围没有或很少的淋巴细胞，II级样品和III级，中性粒细胞的少量周围的小量的细胞和淋巴细胞浸润在样本周围。与巨细胞反应，IV级显示主要以样品周围的中性粒细胞浸润为特征的炎症反应，并且可以观察到吞噬细胞。30只成年兔中进行同种异体肌腱移植，随机分为两组，切成双侧跟腱[2]。1组与未处理的同种异体肌腱修复，和第2组，用深超低温保存和交联用EDC和同种异体肝素化肌腱修复。手术后1，3和6个月处死动物并取出用于光学显微镜和扫描电子显微镜检查。计学方法采用SPSS 16.0统计软件实现，体内组织相容性实验的统计学分析采用χ2检验。验结果结果所有实验动物均存活，手术切口无感染或移植物。

　　交联的组植入大鼠为semaine.Au光学显微镜的皮下组织，腱被释放时，间隙空间增加了，一些纤维变得模糊，组织周围的间质水肿和大量炎症细胞浸润。〜IV，参见图1。4周时，大多数纤维组织被破坏，降解，纤维的正常排列消失，组织水肿消退，炎性细胞浸润降低，但小炎症细胞的数量被渗透，炎症反应占主导地位。II-III级，参见图2.在皮下大鼠中交联EDC组和肝素组后，材料在一周后均匀且致密。围炎症反应轻微。症细胞在显微镜下渗透。的炎症反应是等级I〜III，如示于图34周拉伸时，该结构是总是均匀致密的纤维的排列，但有一个大细胞浸润纤维与纤维方向相同，并且在其周围有大量新的毛细管结构。

　　
　　I至II级注意到炎症反应，参见图4.图4在交联组中，对4周内4周的样品进行α-SMA免疫组织化学染色。联的同种异体肌腱的和不规则的黄色着色微黄肝素化EDC的大多数细胞浸润α-SMA渗入血管内皮细胞，如示于图5和6中的数据表明，该度用EDC交联的炎症反应组较不交叉组中的1和4周更轻，并且值2分别为13.6和14.6，以及差异有统计学显著（p <0.001）。表1。织学观察同种异体肌腱：一个月操作之后，又出现了腱和模型组的骨和疏松结缔组织少量之间有明显的间隙存在，如图1所示。7.一种致密结缔组织肌腱和实验组的骨，并且观察到，但没有痊愈，冷库安装如图少量无序Sharpey纤维结构之间出现了。术8.三个月后，以相对于未处理组，Sharpey纤维结构被布置在所述腱和骨和结缔组织病症之间被关闭，但一些肌腱和骨移植物仍然分离和内口隧道更加明显。更多布置在肌腱和实验组的骨隧道，和纤维软骨之间Sharpey的纤维的填充，但没有形成钙化软骨，如图所示。10。10在手术后3个月的交联组，手术后六个月，未处理组显示出更Sharpey的腱和骨，并部分地设置纵坐标，和纤维软骨填充出现之间的纤维如实验组示于图11，有更多的钙化软骨在隧道，在中心和外隧道，明显腱纤维，纤维软骨，钙化软骨和骨结构四层，形成直接连接。见图12。描电子显微镜表明，被纤维组织和骨组织同种异体腱和骨之间观察到在冷冻保存的结不规则排列的纤维组织型胶原超CDE的深度和交联。血细胞的存在证明了血管中的区域是高，如图13.在一个月的月份，腱中的纤维仍杂乱无章在结的面积和它们部分地mécanisées.Il存在大量不规则纤维类似胶原蛋白，但边界不清，成骨强壮，愈合能力强。见成纤维细胞。状被集成，如图14.在一个月的时间，可以看出类似的纤维具有一定的方向性的边缘区域，以及血管组织中的胶原蛋白，并有大量成纤维细胞和成纤维细胞，如图1所示。15.预处理同种异体肌腱的方法主要是冷冻，冷冻干燥和化学处理[3]。冻保存是目前国内外治疗肌腱抗原性的有效方法。冻包括低温，深和低，冷库安装但降低了腱的抗原性，减少的免疫排斥反应和显著降低了抗张强度和愈合过程完全依赖于外源性愈合，这是受严重粘连并影响术后效果。[4]，并且仍具有低抗原性，存在潜在风险。要采用EDC低毒性和其作用机制的肌腱的化学处理是在“零长度交联”，其中所述胶原蛋白之间的交联，而不会引入新的物质，从​​而降低了抗原性，同时保持生物稳定性筋。

　　[5-6]。该实验中，使用超深冷冻保存和EDC交联来处理肌腱，并且寻求降低抗原性和改善生物稳定性的新的可行方法。种异体肌腱移植的主要问题是肌腱免疫反应2肌腱愈合问题。究Shoubin Gu等人[7]示出了同种异体肌腱交联EDC可以降低其抗原性，增加其抵抗酶和无明显细胞毒性的降解的能力。辉Qi等人[8-9]已经成功修复了兔跟腱与经修饰的无细胞猪肌腱交联碳二亚胺的腱，表明通过EDC交联的同种异体腱具有良好的组织相容性，移植物排斥，生物力学稳固的性能优势。这项研究中的免疫原性的实验中，我们发现用EDC交联的基团的结构仍然是在肌腱显微镜密度均匀的纤维的排列，但也有大量的细胞浸润的与纤维相容，周围有大量的新毛细血管。成。症反应为I-II级，略低于未交联组。果表明，超深冷冻和EDC交联进行肌腱处理具有较低的抗原性和良好的生物稳定性。腱和骨骼的愈合的特征在于移植物与骨隧道中的骨表面之间的Shapery纤维的外观。学显微镜移植，它在这个实验中，该Sharpey纤维结构出现在固化组1个月干预后发现，但数量小，无序;三个月后，在肌腱和骨隧道之间出现了其他有序的Sharpey纤维。纤维软骨的填充物，肌腱与骨骼相连; 6个月，更隧道钙化软骨隧道的中心和外，可见腱纤维，纤维软骨，钙化软骨和骨结构具有四个层形成直接链路。而，未交联的Sharpey纤维组出现较晚。
　　以看出，通过超深度冷冻保存和EDC交联肌腱愈合的治疗比非交联的筋，这缩短了胫骨的愈合时间更强。本文中，进行动物实验，以验证在超低温保存深联异体肌腱和跟腱损伤的修复与EDC交联的优越性。一步研究。
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