研究了美国精子的超低温冷冻保存技术。们检查了精子非常美国鲤鱼的冷冻保存期间，使用任氏液体稀释剂，甲醇的不同体积分数作为保护剂，不同的时间和不同的预冷冻平衡精子稀释鱼的保护作用低温。果表明，保护性防冻剂采用液体仁士鱼和10％体积甲醇组成，精子稀释比（精子与防冻剂的体积比）为1：3，冰箱在4°C下保持平衡20分钟。溶液在液氮表面上方6cm处平衡10分钟，然后在液氮表面上平衡5分钟，最后在液氮中储存。存60天后，运动性监测精子，存活率为80％。
　　究结果为保护淡水鱼遗传资源提供了理论依据。洲鲤鱼;精液;防冻剂;冷冻保存中图分类号：S965.219.12文献标识号：A文章编号：1002-1302（2015）07-0250-02美洲鲤（Alosa sapidissima）属于蝎子属，鱼厚而油腻，味道鲜美营养丰富，是一种优良的集约化繁殖品种。鱼长江和富春江中国，冷库安装它的水自然分布的美国鲤鱼不同地理种群具有相同的纬度和肉的味道和形状基本相同。调查，由于野生动物资源的破坏，鲤鱼长江未在长江捕获了十几年和资源都在消失的边缘，这使难以恢复长江鲤鱼的资源。2003年以来，美国鱿鱼作为长江鲤鱼的替代品被引入中国[1]，美国鲤鱼养殖在中国市场前景广阔[2]。子冷冻保存技术可以成为长期保存稀有物种和重要经济物种的有效技术。
　　对生殖，遗传繁殖和遗传物质保护的生物学具有重要意义。冻保存是长期保存新鲜汽油的有效方法[3]。
　　目前为止，大约有200种海洋淡水鱼被用于冷冻保存研究[4-5]，但没有关于美国精子冷冻保存的报道。项研究的重点是美国精子的冷冻保存。更好地保护美国鲑鱼遗传资源的使用提供技术支持。料与方法试验材料美国鲤鱼精子样品来自南阳龙阳水产有限公司，海南中央河井庄园种植的美洲鲤科。们生长良好，形态正常，没有疾病，性成熟。子采集测试方法2014年5月15日，使用与释放激素促黄体激素（LHRH-A2），绒毛膜促性腺激素（HCG），马来酸（DOM），的鱼催产素注射成熟雄鱼和催情剂;同年5月16日，通过挤压收集精子。集的精液需要乳白色，无血液污染和粪便污染。收集的种子暂时储存在4℃的冰箱中。了检测新鲜和优质，首先使用细口移液管吸取1滴活化溶液在载玻片上，瞄准田地视力，然后从包含精子的培养皿中取适量的精子和解剖针的针尖，并立即将其从载玻片上取下。并活化溶液并在活化后测量活性。的视图为3〜5个字段，精子活力（存活）的统计方法是估计活性精子百分率在百分比的视图中的精子总数的字段，取平均值并选择活力大于90％的精子作为后续的冷冻试验材料。加稀释剂和防冻液稀释与0.780克氯化钠，0.021mmol克CaCl2，0.020克氯化钾，0.200克的NaHCO 3和双蒸水至1升，pH为8.0制备的鱼溶液。冻剂是甲醇，用5％，10％和15％不同的体积分数制备，并在4℃的冰箱中预冷却使用。子的精子冷冻保存方法在0℃，10，10，20，30分钟下平衡，在6厘米的液氮的表面上方的距离为10分钟，然后平衡5分钟在液氮表面，最后在液氮中。

　　备具有不同稀释比的样品在轻水显微镜下，选择具有良好精子活力的精子和抗冻剂，以1：3，1：5，1：8，1稀释：10并混合样品。冷冻管中每管储存1 mL样品。精子在液氮中保存60天后，从液氮中取出，用液氮平衡5分钟，然后在37℃水浴中快速解冻，直至在他们的融合，冷库安装然后立即放置在显微镜领域。清水激活后观察作用力。果和不同防冻液体积分数用甲醇对保鲜效果防冻剂甲醇的三种不同体积分数加入到精子美国鲤鱼并冷冻储存在超低温的影响分析（ - 196°C）60天。为冷冻保护剂，10％甲醇保存效果最好，精子存活率达到80％，当甲醇体积分数为5％时，精子存活率最低，保存效果最差（表1）。用Ren鱼液和10％甲醇作为防冻剂，测定0，10，20和30分钟的平衡时间对美国鲑鱼精子存活率的影响。果显示，在平衡20分钟后精子存活率最大（表2）。用Ren作为稀释溶液和10％甲醇作为防冻剂的溶液，使用鱼测定不同精子稀释率对防腐效果的影响。释后，冷冻精子的存活率最高，达到80％。
　　论和结论目前精子冷冻保存的原理一般遵循缓慢冷冻和快速熔化的原则，该试验的结果与该原理一致。于用于保存鱼精液的稀释剂的制备，稀释液根据用于测试的鱼的类型而变化。释剂的制备是鱼精子冷冻保存的关键步骤，其充分性直接影响保存结果[6]。们普遍认为，稀释剂的组合物是尽可能在海滩appropriée.A本那样简单，最稀释公式鱼种子的冷冻保存的是基于牛精液的冷冻保存式或者凭经验。仁溶液被广泛用作淡水鱼精子的稀释液[7]。这项研究中，Ren的液体配方被用作冷冻保存的稀释剂，并获得了良好的测试结果。同的稀释因子对精子有不同的保存作用，在三种不同的稀释比试验中，1：3的保守率是最好的。加入防冻剂之前，可以在4°C下平衡20分钟，这样可以减少因温度下降造成的损坏并完全渗透防冻剂。
　　海涛和其他人认为平衡一段时间有利于防冻剂的更好运作，并且在冷冻前精子代谢减少，并且有一个逐渐适应冷冻保存的过程[ 8]。子的生理学因鱼类而异，因此确定防冻剂的最佳类型和浓度非常重要[9]。醇是一种相对常见的渗透防冻剂，当用于少数水生生物时，它也具有良好的防冻效果。于防冻剂的毒性随着浓度的增加而增加，所用防冻剂的浓度一般不超过15％，在该试验中，甲醇的防冻浓度可达到15％。Pan等人发现10％甲醇对黄貂鱼防冻有最好的效果[10-11]。本研究中，选择了三种不同体积的甲醇防冻剂，表明10％甲醇防冻剂对美国鲤鱼凝胶具有更好的保护作用。
　　冻鱼精液主要有三种方法，即冷冻谷粒法，安瓿法和小麦细管法。选择的方法受到测试条件和技术手段的限制，最终结果同样好或坏。多研究人员使用冷冻精子来冻结精子并获得更高的受精率，但这种方法需要特殊的解冻液体，这是不实际的。泡的体积很重要，温度难以标准化，操作复杂。试验采用的冷冻塑料冷冻管的方法具有操作简单，安全，易于大规模应用的特点。于精子冷冻保存技术，有价值和优秀的淡水鱼精子，特别是濒危生物和稀有物种的遗传资源，可以长期保存。过建立相应的鱼类遗传资源库，充分储存这些物种的遗传资源，可以为保护淡水鱼遗传资源开辟新的道路。
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