用不同的休息时间，离心速率，离心时间和精细保留处理新鲜精液。冻保存后，测定精子活力，顶体完整性和质膜。择用于冷冻保存兔精子的最佳预处理方案。

　　果表明，离心前将种子静置60-90分钟，然后以1000转/分钟离心，冷冻后成活率和回收率明显优于其他休眠期;离心效果10分钟优于其他离心时间。以1000转/分钟的速度离心，离心同时优于冻融，精子活动，回收，精子顶体膜完整性后其他离心速度下，后离心，细保留对精子的精子的体积比为1：[G-3] 1，冷冻后，回收率，精子的细胞膜的完整性和的完整性顶体优于精子与精制体积比：0：[G​​-3] 1，2：[G-3] 1.兔;精子保存;可持续性;顶体;完整性;质膜;精细保留。图分类号：S82913 4文献标识码：A文章编号：1002年至1302年（201412-0243-02冷冻精子起着遗传资源animales.La精子冷冻保存的保护具有重要作用具有相对技术图纸牛和猪被广泛用于生产实践，但是关于兔精子冷冻保存的研究仍然相对罕见。
　　术解决方案和技术进步尚未完成。季高温，兔子的妊娠率与春季和秋季相比明显减少，无论是自然妊娠还是人工授精，对其影响较大。业：保存超低温和综合技术指南已成为世界上最紧迫的研究课题。前URE材料和方法材料和设备的电子秤，倒置荧光显微镜，电恒温水浴，一种用于电动恒温器，CO 2培养箱，离心机烤箱，含有生物液氮冰箱，蒸汽灭菌器，双纯化表单面，超声波清洗装置，热板，025毫升细管等NaCl的试剂，氯，磷酸氢二钠·12H 2 O，H 2 PO 4，CaCl 2的，氯化镁，无水葡萄糖，二水合柠檬酸钠，钾青霉素，链霉素硫酸盐，柠檬酸，甘氨酸，甘油，牛血清白蛋白，三试验动物1〜2江苏盐城市正山兔业有限公司新西兰优质兔子身体健康，没有生殖疾病，保存在一个笼子里，饮食温度约为24°C，湿度约为约50％，每天施加12小时光照，定量喂养完整的复合饲料，饮用水是免费的。PBS溶液（磷酸缓冲液制备：08克NaCl，002克氯，氯化钙2 20013克，磷酸氢二钠·12H 2 O 02898克，H 2 PO 4002克的MgCl 2·6H2O1克0012，加双蒸水至100mL， 100毫升，pH值调整到72022微米过滤器，并储存在4℃下溶液BTS（制备常温保存溶液：葡萄肫37克，06克柠檬酸三钠，乙二胺四乙酸二钠0125克，0125克的NaHCO 3，氯00075克，青霉素钠006克，硫酸链霉素01克，在4℃下pH值加双蒸水至100ml，冷库安装调整至72微米022和过滤器存储制备冷冻稀释：159克葡萄糖，柠檬酸196克，352克青霉素钠006克，硫酸链霉素，01克，4％甘油，蛋黄20％，多于双蒸水，直到将pH调节至621，022μm并在4℃下过滤。备解冻溶液：葡萄糖50g，c itra钠05克，10％苏打咖啡5毫升，青霉素80 000 IU链霉素硫酸盐100 000 IU添加双蒸水至100毫升，用022微米过滤器和储存在4℃下进行过滤后续使用。具有IP：PI 005g的染色溶液的制备溶解在20ml PBS中并在4℃下储存直至使用。
　　荧光淬灭剂的制备DABCO：甘油/ PBS（9：[G-3]110毫升，DABCO 0024 1毫升6克等份，保存在4℃）。精子收集物装满温水并装入浓缩器中。
　　热在35〜37℃下，在雄性兔的笼收集雌兔成人，促使雄性兔穿过雌兔和阴茎插入位于兔子的外阴精液收集装置。时间到了，精子迅速从兔笼中取出，中间层的热水被排出，精子完全倒入收集通道。
　　常的精子质量控制在37°C，没有选择气味，乳白色，正常和活的精子形态。测试使用中等密度比种子更高07.用于检测精子活力的方法：20微升的精子被引入到预热至37℃的血细胞的平板计数和其移动精子报告在显微镜下观察前面。处理收集在37℃下储存在保温瓶，并使其静置15，30，60和90分钟离心分离精液之前的种子的等待时间，与为500，1000自旋速度，分别为1500，2。

　　000rpm的速度分别离心5，10和15分钟。制的精子量分别离心。子和精子之间的光体积比为0：[G-3] 1 1：[G-3] 1 1：[G-3] 2被保留，然后用等温稀释稀释。
　　释并平衡预处理精子与以1:1的体积比等温稀释混合：[G-3] 2，在5℃下搅拌，并平衡在冰箱中2小时制备和冷冻精液融化与025毫升管方法用于冷冻和含有精子的管端部被放置在管支承在大的开口从液氮表面完全预冷却至3cm冷冻被熏蒸10分钟，然后存放在水箱中保存。去，并直接在热水中于37℃进行45秒解冻管中，用以1:1的体积比解冻等温溶液稀释：[G-3]和10用热在37°C下保持10分钟。标和精子质量的测试方法（1个活精子）速率通过用PI荧光染色的精子的10微升（阳性染色的精子是着色到IP后阳性，的活精子着色为阴性确定染色后的IP，放置在载玻片上，覆盖有保护玻璃和精子活力评估显微镜×至少400控制200精子既计算下面的公式：.. =生存力的数未着色的精子/精子总数（质膜中的精液将与果糖被解冻的2速率完整性 - 柠檬）柠檬酸钠低渗溶液（0675克果糖6，03676克柠檬酸钠二水合物溶于50毫升双蒸水中，调整精子密度至1至2百万spz / ml，37°C孵育30分钟，取20在血细胞上计算400×倒置显微镜的平板计数精子悬浮液的微升，计数在时间至少为200的精子和计算弯曲尾精子率和质膜的完整性之间的比率=弯曲精子数/精子总数×100％（完整率顶体3精子。过Giemsa染色测定，配方：精子顶体完整率=完整的顶体精子数/总精子数×100％。有数据统计重复至少5次，每次计数的精子数不少于200。过t检验和方差分析对测试数据进行统计学分析，p <005是显着的。

　　果与分析结论和讨论实验的结果表明，精液被允许稀释，这使得精液和精子都与病人接触之前站立60〜90分钟，他使其更耐冷冲击和霜冻，休息时间太长。时间会导致精细恶化，这会影响精子的质量。
　　此同时，精子不动，这是容易形成假死的状态，剩下的时间过短，精子不能完全进入与经轻接触，并且耐冲击和感冒很少。
　　1000rpm的离心速度离心10分钟后，解冻后的存活率，冷库安装回收率，质膜完整性水平和顶体完整性水平达到038。别为5429％，5326％和7438％。
　　果旋转速度太低，时间过短，精液体积过大和稀释效果insuffisant.Si离心速度过快和过长，精子冷凝在底部离心管，导致形态异常和活力降低。
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