探索在实验室中冷冻保存小鼠胚胎的最佳条件。据相同的冷冻程序冷冻处于不同发育阶段的小鼠胚胎;使用两种不同的冷冻程序来冷冻相同发育阶段的小鼠胚胎。
先将胚胎在室温下转移到预热的EG中5分钟，然后装入0.25mL塑料管中，每管2-5个胚胎。含有胚胎的塑料小管置于冰箱（滑翔机，英国）中并根据实验设计程序进行处理。作完成后，将其快速放入液氮罐中储存。冷冻保存1周后解冻胚胎的解冻胚胎。薄塑料管从液氮罐中取出，在室温下在空气中放置几秒钟，并置于含有32℃水浴的烧杯中几秒钟。
出细管，将解冻的胚胎推入培养皿中，将已经预热的M16转移并用M16洗涤3次以完全除去EG。胎培养基为M16（Sigma），M16转化为50μL液滴，石蜡油预先涂布2小时，然后置于CO2培养箱中进行平衡。冻胚胎物在37.5℃，5％CO 2，饱和湿度，以及开发和速率的速率转移到培养液滴，10-15个/降，并培养在培养箱记录胚泡发育。胎细胞的计数将胚转移至含有的Hoechst 33342含有10微克/毫升，10分钟，然后在荧光显微镜下观察，并记录干细胞的数目M2。验设计）小鼠胚胎在发育的不同阶段（4-细胞，8细胞，116个细胞和更多）是由congélation.Après解冻的相同的程序，小鼠胚胎的发育和胚泡的速率冷冻比较了三个发展阶段。展的相同阶段的小鼠胚胎使用两种不同的程序冻结冻结：该程序是在-7平衡℃进行10分钟，然后迅速下降至-35℃，在0速率以3℃/分钟的速度在-35℃下平衡。后，将其置于液氮中;程序2：在5°C下平衡5分钟，然后以0.2°C / min的速率降至-7°C，在-7°C下平衡5分钟并以1速降至-30°C 0.5℃/ min在30℃下30分钟后，将其置于液氮中。冻后，比较两个冷冻程序对处于同一发育阶段的小鼠胚胎的影响。果与分析冷冻对不同发育阶段小鼠胚胎的影响表1显示冷冻对不同发育阶段小鼠胚胎的影响存在显着差异（P <0.05）。冻后的胚胎（4个细胞，8个细胞发育率和16个细胞分别为10.0％，35.2％和84.2％，而胚泡8细胞和16个细胞）分别为0％，冷库安装分别为45.5％和62.5％。2示出了冷冻过程对小鼠胚胎的效果。冻过程对一个显著效果小鼠胚胎的冷冻（p <0.05）程序1和2解冻后的胚胎发育率分别为84.2％和60.2％。别为5％和36.2％。胎是一种长期保存动物遗传资源的实用技术。展和胚胎冷冻保存技术的应用减少了时间和空间的限制对胚胎的处理，可以有效防止因活牛运输疾病的传播。去，来自小鼠和人类的冷冻胚胎使用PG作为保护剂，但是最近的研究表明EG毒性较低[2-4]并且已被广泛用于胚胎的缓慢和玻璃化。物[5]。该实验中，使用牛胚胎的冷冻程序[6]，简化了冷冻和解冻过程，并且不同发育阶段的胚胎（4个细胞，8个细胞和16个细胞）是冷冻和解冻。
现4和8细胞胚胎中某些胚胎的透明带完全受损。管透明带的一些胚胎区域是完整的，但细胞质显示出微小的颗粒，并且细胞间隔和卵周空间增加。旦将细胞和细胞的胚胎置于冷冻液体中，通过脱水收缩引起胚细胞;没有造成损害到透明带16上方移除所述冻结液体后，将胚胎已恢复到预冷冻的状态，但也细胞质看起来小。颗粒与罗明久等人的颗粒相同。[7]。
养后，较高的胚囊至16个单元的概率可以达到62.5％，这比太阳燕翔等人通过[8]（91％）报告的显影后的冷冻速率低，但比显著更高4个细胞（0％）和8.（45.5％），结果与Tao等人的结果相同。[9]。这一年中，Whittingham等[1]开发了一种慢速冷冻方法，第一份小鼠胚胎冷冻报告成功：将胚胎置于冷冻保护剂中并分阶段冷却至使用具有不同温差的程序冷冻机或冰箱。胚胎冷冻保存的四个阶段：从室温到诱导结晶温度，诱导结晶（接种），缓慢（0.3°C到0.5°C / min）在中间温度下冷冻（ - 30°C至-35°C）;在液氮温度（-196°C）下快速冷冻。前，胚胎体外成熟培养技术正在变得更加成熟，体外生产胚胎（IVP）的冷冻保存已经成功[10]。着制冷技术的不断进步，经过十年的发展，许多冷冻保存方法的相继成立，如慢速冷冻，玻璃化冷冻法和拉法开管的传统方法。该实验中，研究了小鼠胚胎的程序性冷冻条件，发现各种冷冻程序对小鼠胚胎造成不同的损伤。明带的破裂率越高，囊胚率越低。
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