菟丝子，淫羊藿的水性提取物进行分离，纯化，然后加入到大鼠精子提取物中的含水低温保护剂。子大鼠附睾冻结评价之前和之后冻存和精子活动能力指标。估精子数量。果表明，添加防冻剂菟丝子提取物，淫羊藿可以解冻后指数提高精子活力。
　　C丝子和淫羊藿的提取物在大鼠精液冷冻保存过程中具有一定的保护作用。羊藿;菟丝子;大鼠;附睾精子;精子活力指数中图分类号：R321.1文献标识码：A文章编号：1302至02年（2014）03-0145-03精子冷冻保存技术200多年的历史。
　　类精子冷冻保存追溯到1940年已故目前，精子冷冻保存，主要用于在中国人的精子冷冻保存和成熟的系统相对成熟的精子已经成为银行来代替。求防冻剂人类精子是在全国所有复制中心的比较高：市场上几乎所有的精子cryopréservateurs是由国外公司垄断的生物学。国只有少数研究机构为牛和家禽精子制备了冷冻保护剂。国自行开发的人精子冷冻保护剂用于临床实践。前笔者的研究表明，患者有低或低精子冷冻保存的精子能够获得尽可能多的处理后的精子占资产（PTMS），并适用于宫腔内人工授精（IUI）这样更多的患者可以接受IUI。术治疗降低了治疗费用，使不孕症患者以最低的成本获得妊娠[1]。有的人精子冷冻保存系统适用于人类正常精子。研究旨在探讨中国中草药的水提取物对大鼠精子冷冻保存的效果，以提供精子冷冻保存的患者和低精液的参考。料和方法材料雄性SD大鼠自己的年龄（医学南京大学的试验动物组）通过冷冻保存研究采取附睾精子。Doi Sizi（中国草药配件有限公司安徽精泉集团），批号：。羊藿（安徽万盛中药饮片有限公司），批号：。株植物均购自江苏省传统医学院药剂科。M16（Sigma），批号：11A832。法菟丝子和淫羊藿吸虫的中国草药提取物的制备通过除去500克菟丝子和淫羊藿，并允许他们浸泡用蒸馏水8次8分钟（4 000毫升），煮沸5分钟，煨30分钟，通过过滤布过滤，加水（2500毫升）的5倍的量，然后把它两次以相同的方式，煮沸30分钟并将滤液混合三次。合并的滤液旋转蒸发并浓缩至1000ml。
　　浓缩物置于冰箱中并使其沉降以除去悬浮的颗粒（24小时）。纤蛋白的滤液浓缩至1克/毫升，在70℃的水浴中（相当于1.00克每毫升的药物溶液生药），将滤液浓缩至淫羊藿2μg/ ml（相当于每ml药物溶液2.00g生药）。
　　心浓缩至2500转/分20分钟的滤液，收集将200ml上清液，用蒸馏水稀释为一个晚上，离心机中以2500转/分20分钟，以30 000转/分钟离心保持20分钟并提取上清液。溶液的最终量化为0.5g / ml的菟丝子（0.50克每毫升的药物溶液生药），将滤液浓缩淫羊藿至1.00克/毫升（1.0 g / ml药物/ ml药物溶液）。上清液通过0.45μm过滤器过滤并储存在冰箱中。

　　体含量通过取每次2毫升菟丝子和淫羊藿提取物的的确定，并且放置在恒重称量瓶中。混合物在电炉中在120℃下干燥3小时以缓慢蒸发溶液直至固体组分完全干燥。目前为止，称重准确，重复两次并取平均值。体含量=重量干燥后的重量/总溶液×375.0毫摩尔/ L的Tris 100％的稀释剂制备（51.11毫克/毫升：所述溶液的固体含量根据下式（1）计算出的） 124.0毫摩尔/ L的柠檬酸（26.06毫克/毫升）毫升） 41.0毫摩尔/ L葡萄糖（8.12毫克/毫升）。50ml稀释液含有2.555克Tris 1.303克柠檬酸 0.406克葡萄糖。释的pH调节至7.0，375.0毫摩尔/ L Tris和渗透压调节至375毫渗透摩尔浓度三馏出物。液基础液的制备I：M16培养基 50微克/ mL硫酸链霉素 75微克/毫升青霉素 0.1摩尔/ L棉子糖 0.05％SDS 20％蛋黄鸡蛋（95％）。本溶液II：使用下面的公式首先准备mKRB培养液：CaCl 2的2H2O 1.71毫摩尔/ L，硫酸镁·7H 2 O 119毫摩尔/ L的KCl 4.78毫摩尔/ L，KH 2 PO 4 1.19毫摩尔/ L，碳酸氢钠25.07毫摩尔/ L，氯化钠94.6毫摩尔/ L，葡萄糖5.56毫摩尔/ L丙酮酸钠，0.5毫摩尔/ L，乳酸钠21.58毫摩尔/ L，硫酸链霉素50μg/ mL，青霉素75μg/ mL。

　　
　　1mol / L棉子糖，冷库安装005％SDS和20％蛋黄一次加入mKRB培养基中。加碱溶液I并与蛋黄的溶液II碱后，将混合物连续混合30分钟，离心以6000转/分30分钟，将上清液再次离心用HCl将溶液的pH调节至7.3，并以045μm施加过滤器。滤并储存在低温下制备的碱性溶液以供使用。验组I：对照组C1：PBS（5％） 碱溶液I（95％）;菟丝子T1A的亚组：0.5克/毫升菟丝子（1％） PBS（4％） 碱溶液I（提取物95组菟丝子T1B的：0.5克/毫升菟丝子提取物（2.5％） PBS（2.5％） 碱溶液I（95％）菟丝子T1C组：0.5克/毫升菟丝子（5％） 碱性液的提取物的I（95％）淫羊藿Y1A组：1μg/ ml的淫羊藿提取物（1％） PBS（4％） 碱溶液I（95％）;组淫羊藿Y1B：1μg/ ml的提取物淫羊藿（25％） PBS（2.5％） 碱溶液I（95％）;组淫羊藿Y1C：为1g /淫羊藿提取物溶液（5％） 碱溶液I（95％） 1，1：1：大鼠精液和冷冻液以1:1的比例混合2（体积比），并分布在冷冻的吸管试验II C2对照组：PBS（10％） 的溶液基本I（90％）;亚组菟丝子T2A：0.5克/毫升菟丝子（2.5％） PBS（7.5％） 碱溶液I（90％）的提取物;分 - Dodder组T2B：Cuscuta提取物，0.5 g / mL（5％） 溶液碱PBS（5％）I（90％）; T2C亚组菟丝子：菟丝子提取物0.5克/毫升（10％） 基本溶液I（90％）。淫羊藿Y2A：1μg/ ml的淫羊藿提取物（2.5％） PBS（7.5％） 碱溶液I（90％）的;淫羊藿Y2B组：1μg/ ml的淫羊藿提取物（5％） PBS（5％） 碱溶液I（90％）的;淫羊藿Y2C组：1μg/ ml的淫羊藿提取物（10％） 基本溶液I（90％）。大鼠精液和冷冻液以1：1，1：2（体积比）的比例混合并分布在冷冻的稻草中。验III：对照组C3：基础溶液II; d丝子亚组T3A：0.5g / ml d丝子提取物（0.5％） 碱性溶液II（99.5％）; T3B d丝​​子组：0.5g / ml d丝子提取物（1％） 基础溶液II（99％）;子组T3C菟丝子：0.5克/毫升菟丝子（1.5％） 碱溶液II（98.5％）的提取物。羊藿Y3A组：1μg/ ml的淫羊藿提取物（1.5％） 基础溶液II（98.5％）的;淫羊藿Y3B组：1g / ml淫羊藿提取物（2.5％） 碱II（97.5％）;淫羊藿Y3C组：1g / ml淫羊藿提取物（35％） 碱性溶液II（96.5％）。制备每个精子冷冻保护剂组后，将其在0.22μm过滤器上过滤并使用。并在附睾精子稀释麻醉每只大鼠用2ml水合氯醛至10％，然后解剖附睾尾，并放置在含有2毫升溶液中的353 037培养皿稀释。集精子样本以确定精子密度。（N），精子活力（SMI），用稀释剂将精子密度调节至20万/ mL。用Makler计数器调节密度。装载精子和冷冻保护剂在冷冻吸管和冷冻管中以1：2的体积比分布。冻和融化秸秆或包装冷冻管放入冰箱中4℃下30分钟，熏蒸在液氮的蒸汽10分钟，以1至2厘米的距离从液氮表面积，然后直接引入液氮。冻吸管取出液氮，并使其在水浴中放置在37℃下10秒，然后在37℃下转移到一个353 037培养皿并培养在培养箱中10分钟，以测量解冻后的精子活力和畸形。液氮中取出冷冻管，并使其在37℃水浴中静置10分钟。
　　全解冻后，测量运动性和精子畸形。子存活率精子的1点一滴一滴至叶片的表面上，装载的薄片，注意活性精子的数目，活性精子的数目，非活动精子的数量，精子活动指数的计算如下：菟丝子，液体最佳浓度与菟丝子提取物和2.5％淫羊藿提取物的1％解冻后的冷冻保护剂的水萃取淫羊藿测定，活性精子可以观察到。有菟丝子（T3B）的1％提取物的冷冻保护剂表现出解冻后的最高精子的活动性指数，其中分化的许多其它基团。而，与2.5％淫羊藿提取物（Y3B）组没有显着差异。果和分析相对于其他哺乳动物的精子细胞，大鼠精子尾部是薄且他的头是窄和锥形[2-3]。

　　些结构特征确定它们的极端敏感性对环境变化如物理损伤，pH值的变化，冷库安装渗透压变化，温度变化等[4-5]。究人员在不同degrés.Les结果离心精子表明，精子活动力，在700转是离心后显著下/ min离心5分钟，精子膜的完整性几乎为零经过三次离心。此，冷冻大鼠精子的过程应尽量避免外部损伤。冻大鼠精子更加困难，主要是因为脂质含量和精子质膜的组成[6]。

　　
　　吁訇孵育大鼠精子，小鼠和人30分钟在人类精子尾部humain.La精子的溶胀试验低渗溶液有弯曲的或肿胀的尾巴和精子在小鼠也似乎类似于人类精子。鼠精子与上述两种精子显着不同，尾部没有屈曲肿胀[7]。梅尔斯特及其同事比较各种动物精子的细胞膜的磷脂，发现大鼠精子的细胞膜是从牛和羊的显著不同，这表明它是比较困难的关联精子从大鼠到细胞膜[8]。

　　鼠被用作在很多研究领域中等规模的实验动物，以提高人类疾病模型的数量，就必须树立节约行之有效的方法。
　　而，大鼠精子结构的特殊性导致探索精子的冷冻保存。果我们了解大鼠精子的生物膜结构，然后研究该功能的生物学机制，有可能取得进展过程冷冻冷冻保护剂。今后的工作中，中国传统医学的独特风味的活性成分，如菟丝子，淫羊藿和丹参，应选择大鼠精子冷冻保存。
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