目的：研究不同冷冻方法对成熟卵母细胞（MII）体外受精和胚胎发育的影响。法收集昆明小鼠MII期卵母细胞，玻璃化冻融冷冻。冻后比较两组的复苏率，受精率，卵裂率和胚泡形成率。果除霜后冷冻MII卵母细胞的存活率明显高于冷冻编程组（针对55.5％80.1％，P <0.01）和胚泡形成速率有统计学显著的显著高。着性（28.6％对19.4％，p <0.05）。

　　论冷冻保存方法在卵母细胞冷冻保存过程中优于程序化冷冻方法。老鼠;卵母细胞;玻璃化;发育中的胚胎[学习在ratLIU鑫xiong.Qinzhou生育中心医院成熟的卵母细胞为孕产妇和儿童健康的冷冻保存的不同方法的效果，广西53500，Chine【摘要】目的浏览器不同方法对体外受精（IVF）和解冻中期II（MII）卵的胚胎发育能力的影响。法杂草生长以观察存活率，IVF，裂解和bastocystes.Résultats通过玻璃化的卵母细胞冷冻保存的存活率均高于通过冷冻保存（针对55.5％80.1％，p值设定显著更高< 0.01）。同组中的动脉粥样硬化率也有显着差异（28.6％对19.4％，p <0.05）。论玻璃化冷冻保存对卵母细胞的冷冻保存更为有效。于MIIstage.[关键词]鼠标;卵母细胞;玻璃化;胚胎发育“蜂窝冷冻保存”是辅助人类生殖领域研究的热点之一。冻技术主要包括定期冷冻和玻璃化。年来，由于改进的技术和冷冻方法，尤其是玻璃化和冷冻技术的发展，冻融卵母细胞的回收率和受精率得到改善。果不理想[1，2]。这项研究中，老鼠MII期卵母细胞作为模板和卵母细胞（métaphageII，MII）的小鼠成熟的编程冷冻和玻璃化，和卵母细胞的发展潜力被冻结解冻进行比较后， 。目的是为人卵母细胞的低温保存提供参考和理论。料和方法一般信息实验动物购自广西大学医学院动物实验中心昆明小鼠，体重25-35g。料条件为14小时，在光照和黑暗中进行10小时。鼠可以自由饮用和进食。

　　收集鸡蛋一个星期后，冷库安装雌性小鼠接受人尿促性腺激素腹膜内注射（HMG）10 IU和48小时后，人绒毛膜促性腺激素的注射（HCG）10 16 IU 〜18个小时后，将小鼠颈椎脱臼处死，收集并放置在80 IU / ml的透明质酸酶的颗粒细胞向卵母细胞，在卵母细胞和第一极体形态正常进行测量，并且选择。
　　结。母细胞的免疫和解冻将收集的MII卵母细胞编程用于冷冻和玻璃化。定的冷冻方法：根据说明进行冷冻和解冻。冻玻璃化方法：冷冻：第一洗涤在PBS鸡蛋 胎牛血清的15％溶液（FCS）2〜3次，然后转移至乙二醇的10％的溶液（EG ） 10％二甲基亚砜（DMSO）。留30秒后，将其在20％EG 20％DMSO 0.5摩尔/ L通过用管虹吸转移到蔗糖溶液中，将卵抽吸到管已经引入了OPS和液氮。
　　冻：将蛋相继转移到含0.5mol / L，0.25mol / L和0.1mol / L的蔗糖溶液中，各自保持3分钟。后，将细胞洗涤3〜4次，和卵母细胞的细胞质正常结构，完整的透明带和小间隙空间在5％CO 2被转移到培养液中并培养在培养箱。

　　肥和施肥当天体外培养，昆明小鼠性成熟的成年男性处死sélectionnées.Après颈椎脱位，附睾的尾部被刺穿而精子悬浮液在培养培养箱在37°C下培养1至2小时。5×10 6 / ml的终浓度进行授精。6至9小时后，在显微镜下进行显微镜检查以观察受精（参见第二极或双原核卵受精）。天观察受精卵的发育并记录。计学方法采用统计软件SPSS 10.0对数据进行处理，并通过检验2进行分析.P <0.05表明差异有统计学意义。果解冻后，通过玻璃化冷冻MII卵母细胞的再活化率为80.1％，明显高于冷冻组（55.5％）（P <0.01）的显著高。冻后，卵母细胞囊胚形成率分别为28.6％和19.4％，差异有统计学意义（p <0.05）。

　　组受精率和卵裂率无显着差异（P> 0.05）。表1.讨论牡蛎细胞冷冻是辅助生殖技术（ART）领域的重要研究领域之一。
　　过卵母细胞的冷冻保存于1986年成功地获得在世界IVF的第一种情况下然而，由于其自​​身的生物特性，如一个大的蛋量和低的比率膜膜/细胞质[3] ，鸡蛋冷冻的发展较慢。尚未在临床实践中广泛使用，仅限于实验研究。母细胞冷冻保存技术主要包括程序化冷冻和玻璃化。程冷冻的方法涉及冻结缓慢根据以逐步脱水cellules.Une时间达到预设温度的预定程序将所述胚胎cryoprotecteur.Le节目的一定浓度时，将液氮迅速引入到实现冷冻保存的目的。序化慢速冷冻是一种有效的方法，但是不能避免在冷冻和解冻期间通过形成冰晶对胚胎的损害。璃化是一种快速冷冻技术，它允许细胞快速越过一个“危险温度区”，降低其低温敏感性，并加以改造玻璃非结构化玻璃，保持的状态分子和离子。种分布避免了冰晶的形成，减少了细胞的机械损伤，并使细胞在冷却过程中保持其结构完整性。这项研究中，MII卵母细胞的小鼠通过冷冻和玻璃化编程，这表明，冷冻组卵母细胞中的玻璃化的再活化率为80.1％和再活化的速率分别保存程序化冻结法。55.5％，差异有统计学意义（p <0.01）。璃化组囊胚水平为28.6％，明显高于程序化冷冻组（19.4％，p <0.05）。可能是由于这样的事实，玻璃化技术的快速冷却使卵母细胞快速通过冰晶形成区的温度（5℃至15℃）通过，从而避免晶体的形成细胞内外的冰，尽可能减少透明带和细胞中的冰晶。骼损伤表明玻璃化技术可以比传统的冷冻方法更好地保护卵母细胞，这与其他研究人员的发现相似[4，5]。

　　之，上述结果表明，小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果比由程序冷冻方法的显著更好，这表明玻璃化方法的冷冻效果优越对于冻结方法。可能与玻璃化技术的快速冷却有关，以防止冰晶被卵母细胞损坏。
　　此，玻璃化技术是一种高效，简单，安全的低温制冷技术。低毒性的玻璃化溶液的冷冻和解冻后的发现和应用，冷库安装振兴率，受精率，卵裂率和囊胚率将卵母细胞的冷冻保存的主要方法。参考文献[1] Kim TJ，Laufer LR，Hong SM等。母细胞的玻璃化导致妇女fertile.Fertil与不孕，2010.93高怀孕率。67-474.[2]在体外卵母细胞的廖洪庆凌盖炉长赋等人，成熟和玻璃化未成熟，中国现代医学杂志，2010，20（11）：1614-1617。[3] E卢塞纳，DP贝纳尔，卢塞纳C，生育与不孕2006，85（1）：1082至1111 [4]安蒂诺里男，利卡塔E，G达尼，等人卵母细胞的人Cryotop玻璃化生存率高。和健康交付生殖生物医学在线，2007，14（1）：72〜79 [5]利伯曼Ĵ，塔克MJ.Sills ES.La Cryoloop玻璃化在辅助生殖：在1000个人卵母细胞的存活率的分析后用增加的聚合物的冷冻保护剂快速冷却.ClinExpObstetGynecol，2003，30（23）：125-129。
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