检查冷冻保存猪卵母细胞解冻的方法和保护的作用，影响了保护剂的保护和选择因素。后，探讨了使用猪卵母细胞冷冻保存技术的前景。母细胞;冷冻保存;猪中图分类号：S828文献标识码：A文章编号：1006-6500（2008）03-0027-03近年来，随着生物技术的动物胚胎的快速发展，卵母细胞中不断增加的需求N'仅仅通过在体内循环成熟的卵母细胞就无法满足研究和生产的需要。了获得大量卵母细胞，在屠宰场丢弃的卵巢的恢复应该是一种有效的手段。母细胞动物是动物的卵母细胞的遗传信息小型幼儿园冷冻保存的载体，它不仅能够确定雌性动物的基因库，同时也充分利用资源的卵母细胞因此，没有研究体外受精，转基因转移和核移植的技术。小时和地理限制。一方面，通过体外受精生产体外胚胎也可以是胚胎生物技术的丰富材料来源。猪卵母细胞进行冷冻保存的研究也可能是丰富低温生物学理论，方法和实践的重要依据。
卵母细胞冷冻保存玻璃化冷冻保存是卵母细胞的冷冻保护剂中的溶液，其直接存储口服在液氮中平衡或不平衡的短时间后的高浓度的存储。旦卵母细胞中干燥，在冷冻溶液在一定程度上，这已经渗透到细胞中内源性细胞质大分子（如蛋白质，脂质）和冷冻保护剂浓缩并在形成细胞内的玻璃化冷冻过程。成冰晶，从而避免由细胞中的冰晶形成和保护卵母细胞引起的化学和物理损伤。前，玻璃化主要是通过一种在两个步骤中进行，这就是说，预平衡与冷冻保护剂的3至5分钟的低浓度，然后冷冻液的最终浓度被立即放置和管立即用液氮熏蒸1至2分钟或不用。接输入液氮。方法的特征在于细胞在室温下脱水后不需要冷却程序，这是简单和容易的。秆法使用EFS40作为玻璃化液。GV阶段或MII的卵母细胞用TCM199并转移至EFS20，平衡1分钟，然后转移到EFS40，每片含约15卵母细胞的几个100微升液滴，并平衡1分钟。虹吸管或注射器吸入吸管。旦安装了管，将其在液氮蒸汽中平衡3分钟，然后引入液氮或直接引入液氮中。入卵母细胞并吸入GMP管中。入剂都是含有卵母细胞的冷冻液体。
管完成后，在液氮蒸汽中平衡3分钟后提供液氮。究表明，BPF的内径较小，导热性能良好，加快了冷却速度和冷冻效果;此外，GMP可以克服OPS管的缺点，OPS管容易漂浮并在液氮中爆裂，便于储存。程冷冻卵母细胞与冷冻保护剂平衡，然后以1℃/ min的速率，诱导在-5至结晶至-7℃，然后冷却至30至-40℃的温度下的速率冷却0.3至0.8℃/ min。存在液氮中。GV阶段或MII的卵母细胞在TCM199中洗涤2-3次，并转移到冷冻保护剂（例如，DMSO，甘氨酸）的浓度梯度的进行均衡。
后，放入0.25ml塑料吸管，每个管含有约15个卵母细胞。完成后，将其释放到编程的冷冻室中。OPS方法Vajta等人成功地使用了OPS方法，该方法显着提高了猪胚细胞的存活率。加热普通的0.25毫升细管，将其拉至内径约1/2。胚胎置于1-2μL冷冻液中后，将卵母细胞吸入虹吸OPS管中。OPS管的内径是较薄的，冻结围绕卵母细胞的液体的量减少，从而使冷冻率大大增加，从而使卵母细胞可迅速穿过致死温度区在冻结期间没有受到损坏。Françoise和她的合作者使用OPS方法冷冻猪卵母细胞并在移植后获得冷冻胚胎仔猪。滴方法是使用微冻结溶液的冷冻方法。卵母细胞（约6 UL）冷冻液滴在液氮中冷冻固体直接沉积，然后将固体颗粒收集在一个小管并储存在液氮中。者，可以在1mL冷冻管中制备含有卵母细胞的液滴，然后将冷冻管直接置于液氮中储存。滴方法使用简单，并且还允许猪的应用取得突破。Misumi等人。经用来保持microdropes方法卵母细胞porc.Après解冻并培养24小时，卵母细胞的生存率为91.3％，这比传送管方法mince.Après的显著更高胚胎中，获得27头仔猪，结果良好。线的电子显微镜方法镀铜的电子显微镜方法是最近开发的玻璃化方法。使用铜网电子显微镜如蛋承载，并且卵母细胞被放置在冷冻液体的小体积（1微升），然后直接保存在液氮中，并冷冻速度可以达到3000℃/ min或更高。蒂诺及其同事使用TEM解冻，卵裂率和胚泡发育的体外受精后达到29％和10％的速度之后冻结卵母细胞和正常形态发生率为60％。体表面的方法和循环方法冷冻开始等，Vitri-Fi的阳离子的固体表面（SSV）和用于冷冻至超低温深冷virolisation（CLV）卵母细胞猪肉，冷库安装其中，所述SSV方法是含卵母细胞浸入液氮金属表面冻结的液滴，在冷冻之后卵母细胞的存活率为60％和CLV方法是冻结含有关于卵母细胞冷冻液滴冷冻环膜，然后浸泡溶液。气的存活率为89％。他方法除了技术改进，冻结承载，增加保护性因子和细胞疗法还可以提高猪卵母细胞的卵母细胞冷冻保存。Men等人。究体外生产的猪囊胚在非常低的温度下冷冻，发现加入体外发育环境胎牛血清的显著提高胚胎的存活率解冻后。细胞治疗方面，一些研究者消除微观内部脂肪颗粒或冷冻猪卵母细胞，这显著提高了卵母细胞的存活，证明了脱脂处理，以增加冷冻前冻结。生存方法。外，Dobrinsky等人证明向冷冻溶液中加入细胞松弛素B也提高了猪卵母细胞的冷冻效率。的解冻方法玻璃化的卵母细胞的方法是解冻吸管或管子GMP并除去液氮罐他们已经在37℃在一个塑料容器中平衡后和直接转移用移液管在0.5mol / L蔗糖溶液中。均余量持续5至10分钟，洗涤后余量良好。冻和冷冻一定时间后，将吸管从液氮中取出，在空气中平衡10秒钟，然后放置在37℃的恒温水20秒。后用橡胶套擦拭附着在吸管上的水珠。射器将含有卵母细胞的冷冻液注入10cm塑料盘中。移液管吸出卵母细胞，转移到低浓度的冷冻溶液中进行稀释。EG例如，卵母细胞首先在0.5 mol / L蔗糖的溶液转移至6％EG 5分钟，然后转移到3％EG 5分钟，然后平衡后5分钟;将卵母细胞转移到TCM199（含有10％FCS，下同）中并洗涤3-4次。猪的冷冻效果的评价卵母细胞形态评价冻融卵母细胞洗涤几次，并在用于形态学检查更高的放大倍率在倒置显微镜下放置。切都可以回到正常状态，细胞质充满均匀，透明带是完整的和位于GV卵母细胞外的卵丘细胞不沾边。
有广泛扩散（>卵母细胞直径的5倍）或具有pbI的那些被认为具有发育能力。染色台盼洗脱防冻液后，将卵母细胞转移到0.3％台盼蓝，有色在37℃进行3分钟，然后洗涤4〜5次，并在显微镜下固体放置。卵母细胞未染色，死卵母细胞染成蓝色。FDA（荧光素二乙酸酯）染色：卵母细胞从防冻剂取出，放置在FDA染色溶液至5％至10％，有色在37℃下3分钟，放置在TCM199 3至5一旦，立即获得荧光剂在显微镜下观察。
胞质荧光卵母细胞被认为是活细胞和非荧光的死细胞。外受精鉴定的MII卵母细胞，冷冻和解冻，在体外受精卵卵裂的情况下，卵母细胞具有发展潜力。响猪的冷冻卵母细胞的因素冷冻和解冻过程中常见的猪卵母细胞的因素，由于诸多因素，导致冻结的低效率。要的是要克服这些常见因素对低温生物学的影响。母细胞的劣化通常原因可概括如下：（1）形成的细胞内冰晶体，细胞结构破坏，（2）胞外冰晶造成物理损伤的形成，（3）冷冻保护剂的毒性， （4）细胞膜内外渗透压差导致细胞的萎缩或肿胀（5）引起的霜的细胞损伤，（6）的细胞的质量和等。
此，冷冻保存的卵母细胞的存活依赖于渗透抗冻剂的渗透性，化学毒性的重要性，防冻保护剂的非渗透性的渗透压和存在或没有冰晶形成。规程序冷冻方法通常使用EG，DMSO，Gly等。为主要的渗透防冻剂。
于其低的浓度和它的低毒性的细胞，它需要冷冻，以及在种植人工冰之前较长的冷却时间，冰晶形成会引起对细胞的物理损害和影响他们的活力。加入大分子物质，蔗糖，能够防止溶液中以形成冰晶和化学毒性蛋可以在冷冻过程中被抑制。此，对猪肉卵母细胞的冷冻效果明显优于传统的程序化冷冻。外，在过去的十年中，研究人员修改了OPS的薄管冷冻方法，通过提高冷却速度来减少霜冻损害。外，与玻璃化溶液中的高浓度的卵母细胞的接触时间小于1分钟，化学毒性和渗透性损伤大大降低，猪卵母细胞的冷冻保存被中断。殊因素众所周知的是，猪卵母细胞含有大量脂肪颗粒，其中，根据大多数研究人员，使得它更温度敏感并且更损坏，这在很大程度上易感的低温保存猪卵母细胞的难度。冻保护剂的选择许多研究人员对冷冻剂的类型和浓度进行了广泛的研究，试图找到冷冻猪卵母细胞的最佳方法。和同事使用细胞毒性测定法来研究的四种常用的冷冻保护剂，甘氨酸，DMSO，EG和卵母细胞猪肉1，2-丙二醇（PROH）的影响。果表明，在卵母细胞猪肉的冷冻保存，各种冷冻保护剂的功能是保护鸡蛋猪肉，但是效果是不一样的，甘油的效果低，EG是比较好。而，许多研究人员在低温保存猪卵母细胞时仍然选择甘油作为冷冻保护剂。此，目前尚不清楚哪种冷冻保护剂对猪卵母细胞最有效。用前景目前，玻璃化是更具有可操作性的和潜在的编程冷冻，同时减少了蛋和散热器（例如液氮等）之间的空间距离，从而增加冷冻的速率和冷却后，可以增加猪蛋数量。母细胞冷冻效率最有效的方法。他技术如离心和脱脂颗粒也可以在一定程度上提高冷冻效率，但操作复杂并且需要优化。般来说，为了使猪卵母细胞的冷冻保存切实可行，有必要开发新技术并进一步提高冷冻效率。
本文转载自
冷库安装 https://www.iceage-china.com