式中,F为两电荷间的引力大小;/c为比例常数;和92为两个电荷的电荷数;r为两个分离电荷间的距离(膜的厚度)。等式显示当膜变薄时,压力强度以指数上升。
膜的流变学特性使得它能在压力下“流动”或伸缩自如地变形。随着压力以指数上升,膜将达到一个点,超出了它伸缩自如地恢复的能力极限,将发生电的崩溃引起膜的局部缺失。
一般认为,微生物细胞内约IV的横跨膜电压将引起细胞电崩溃的发生。取决于细胞相对于外部电场的方位,膜的分裂最有可能发生在细胞膜上之前就已存在的局部混乱处,并被电场引起的压缩扩大了。孔的形成使得细胞膜的通透性增加,允许细胞内外物质的交换,引起渗透的不平衡,加剧了细胞的分裂(Zimmermann,1986年)。已有报道说当由于渗透的不平衡引起的细胞增大约接近正常细胞体积的155%时,细胞膜破裂,有红血球出现(Tsong,1990年)。
值得一提的是,这些研究中没有一个被证明是膜通透性改变的主要机制;并且有可能某些或所有这些过程对应用脉冲电场时产生的细胞损坏都有影响。
PEF技术中的关键因素
PEF技术用于微生物灭活处理的效果取决于与所使用设备的类型有关的一些因素,如处理参数的设定、处理介质的类型、处理的目的微生物。但所有有关因素之间的各种交互作用也会产生较大的影响。
工艺因素PEF设备的设计通常决定了其工艺,但不同的产品和处理过程对工艺参数的限制也是有关系的。
①电场强度:电场强度已被确认为是影响PEF灭活微生物效果的最重要因素。Hamilton和Sale(1967年)证明PEF的破坏力取决于电场强度和总处理时间,冷库工程而局部加热、电解、电流密度和能量输人对膜分裂不起作用。后来的研究也证明了必须达到临界电场强度才能对微生物细胞产生影响,而在此极限强度之上的电场强度对微生物灭活的效果以指数上升(Hulsheger等,1981年)。临界电场强度与外部电场强度能够降低约IV的横跨膜电压的能力相应,而这是膜分裂的极限。实际上,电场强度在确保达到处理要求的情况下应尽可能地低,因为髙的电场强度也将引起所处理液体的绝缘效果变弱而产生火花和不利的反应(Zhang等,1994,1995年)。
方形脉冲被认为优于指数下降脉冲(Qin等,1994年;Zhang等,1994年;Pothaka-mury等,1996年),因为应用方形脉冲时,在脉冲的整个持续时间里脉冲的强度维持不变,而指数下降脉冲的强度会变化,从峰值到临界电场强度再到亚致死电场强度直到最后降到基线。应用指数下降脉冲的处理效力从峰值电场强度时的最大值直线下降到临界电场强度时最小值。而临界电场强度后传递的其余脉冲能量则遗留下来了,除了浪费(增加能量支出)外,就是对处理液体加热,对非热灭菌产生负面影响(Epri和Army,1997年;Epri,1998年)。Qin等(1994年)研究发现方形脉冲灭菌量比指数下降脉冲多60%(脉冲宽度以t的形式相等)。
一般认为贮藏加工中的非热杀菌可由PEF来完成,操作量为100g/mL[指每ImL体积中所能处理的物料量]左右(Zhang等,1995年),这取决于使用的设备、脉冲的波形、介质的导电性和要求的不活跃物质的水平。极端的实际条件可使用少于80g/mL的条件或者高耗能加工使用大约400g/mL(Barsotti和cheftel,1999年;Schoanbach等,2000年;Epri,1998年)。据报道使用脉冲回复波可减少能耗到大约5g/mL;但是这些还没有被独立的研究团体证实,需进一步的研究(Epri,1998年)生物因素目标微生物的自身性质对确定PEF无效的程度是决定性的因素。如类型、种类、尺寸、外形或者生理状态决定了易受影响微生物受PEF作用的效果。这些因素都是内在的,它们决定了被加工产品的性质并且不能被控制或加工前进行人为的改变。食品中通常包含一个复杂的微生物群并且组织与组织之间对波电场的敏感性是不同的。所以PEF条件应该被计划和实验,考虑产品中最具耐受性的组织以保证对所有存在的微生物进行充分的作用和有效的控制。
①微生物的尺寸和外形:微生物的尺寸和外形决定了可引起细胞膜破裂的外加电场强度。细胞膜移动有大约IV的电势使膜具有渗透性。作用于一个细胞的外加电场强度可通过拉普拉斯等式进行计算:
Vc=fEcacosv(9-2)
式中,为极限体积;a为细胞半径;为要求的主电场强度;v为膜与电场方向的夹角;/为形状因子,等于1.5左右,与圆柱形细胞的长度和直径(心有关:
这些等式表明直径越大的细胞对外加电场感应越高的膜移动电势,并且与电场方向垂直的膜区域电势最高。
②微生物的类型:有关PEF对微生物影响的描述给出了在PEF作用下微生物通常的变化。但是这些不能当作严格的准则,因为特殊情况下可能违背,甚至当一种明确的类型或物种已经符合大量的条件,但其中一些敏感或具抗性的个体或品种还是可能与这些准则有差别。一般情况下,酵母菌比细菌对PEF作用更为敏感,这可能是由于酵母与细菌相比尺寸较大。如前所述,在细菌中,革兰阴性菌比革兰阳性菌更为敏感。这可能部分是由于在革兰阳性菌细胞壁上有厚的黏肽骨覆盖而革兰阴性菌只有薄的膜覆盖。革兰阴性菌中有较高抗性的菌与革兰阳性菌相比较的报道在文献中可以找到。
已证实处于对数增长期的微生物比处于滞后和稳定期的微生物对PEF更为敏感。假设这种对PEF更为敏感的情况是由于“新鲜的伤痕”或最近的细胞分裂后膜中的敏感部位存在。残余细胞的最高数量出现在稳定阶段的早期,这时微生物不再忙于繁殖并且环境条件没有达到有害于或抑制细胞存活的程度。
PEF技术中另外一个很重要的微生物的生理因素是其繁殖方式。形成孢子是霉菌和酵母菌的繁殖方式。形成的孢子中包含遗传物质胶囊,遗传物质被包裹在许多层有抵抗性且难溶的物质中。细菌的孢子比霉菌和酵母的有更高的抵抗性。无性生殖的细胞比孢子对PEF更为敏感。是否PEF作用于敏感的孢子可破坏它是一个争论的话题,并且一些研究表明孢子根本不受PEF影响,另外一些则认为PEF至少可使孢子失活,所以需要进一步的证实。在最先的加工阶段中孢子的发芽是被促进的不要求杀灭孢子,PEF技术仍旧是一种很好的候选技术以改善或取代类似的工艺。
与被加工生鲜产品原料相关的因素目前从简单的实验模拟食品到复杂的真实产品都有应用脉冲电场技术的研究报道。被加工产品的物化性质对应选用的技术及它的效率是很重要的。被加工产品的性质是内在的只能改变而不能修改。这种原料本身与加工相关的性质有:电导性、绝缘性、pH、离子强度、营养物质含量、悬浮固体量和黏度。温度是产品的重要性质,它可以在加工过程中被调节到合适的水平,并且可能是唯一一个与被加工产品相关的外部因素。对特殊的产品在加工过程中应用PEF是一个特殊的例子,这时内部因素可以被控制(在一定范围内)以达到用PEF加工的最佳条件并且其代表了一个今后PEF技术的重要领域。
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